稀土上转换发光材料标记抗体的制备及在免疫组化中的应用.pdfVIP

Vo1．34 高等 学校 化 学学报 No．4 2013年4月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 788～793 doi：10．7503／cjc 稀土上转换发光材料标记抗体的制备及 在免疫组化 中的应用 陈 颖 ，李菲菲 ，李眷光。，潘庆芝。，崔满华 (1．吉林大学第二医院，长春 130041；2．长春市妇产医院，长春 130042； 3．吉林大学无机合成与制备化学国家重点实验室，长春 130012) 摘要 采用微波辐射法合成了具有上转换发光特性的六方相纳米粒子NaGdF：Yb ，E，(UCNPs)，其晶粒 大小约为65nm，且粒子在980rim的激发光下显示绿光 (550nm)．进一步在 NaGdF4：Yb ，Er3纳米晶的表 面包覆了一层二氧化硅层，进行氨基功能化后获得了表面共价结合氨基基团的粒径为70gin的上转换发光 纳米微球NaGdF4：Yb“，Er“@SiO2-NH2(UCNPs@SiO2一NH2)．通过共价键将 UCNPs@SiO2一NH2与多克隆抗 体免疫球蛋白联接，将标记后的多克隆抗体应用于传统的免疫组化检测子宫内膜腺细胞中基质金属蛋白酶 组织抑制N-4(TIMP-4)蛋白的表达．结果表明，微波合成的稀土上转换发光纳米材料形貌规则且粒径均一， 包覆硅壳后材料具有 良好的分散性和水溶性，荧光强度高且稳定，在980rim激发光下对生物组织无背景荧 光，可以很好地检测组织中蛋 白质的表达． 关键词 上转换发光；稀土氟化物纳米晶；免疫组化；多克隆抗体 中图分类号 0614．33 文献标志码 A 与传统的下转换生物发光标记材料(如有机染料、金属和半导体纳米晶等)相比，稀土上转换发光 纳米材料具有发射带窄、反斯托克位移较大以及光穿透性和空间分辨率较深等优势，且对生物组织无 损伤，无背景荧光并具有 良好的光稳定性，因此在生物利用领域备受关注 ¨ ．研究人员已经采用不 同的方法制备了荧光产率较高的上转换发光纳米材料 (Up-conversionnanopartieles，UCNPs)，并实现了 与生物分子的偶联，制备了生物荧光探针，以应用于生物分子间的靶向识别 J、多模式的生物成 像 ]、光动力学治疗 及药物的靶向运输 等．免疫组化技术作为一种操作简单、检测快速且结果 可靠的蛋 白检测方法，广泛地应用于医学研究和临床诊断中．目前常用的荧光抗体猝灭时间短且猝灭 后无法继续观察结果，限制了该技术的普及和应用．稀土上转换发光纳米材料具有 良好的光稳定性， 有效地解决了这一难题，并表现出了较高的灵敏度 ． 本文采用微波法合成上转换NaGdF4：Yb ，Er¨纳米粒子，以无机材料二氧化硅作为外壳，改善了 荧光纳米颗粒的稳定性 ¨引，并对惰性的二氧化硅层表面进行氨基功能化．利用硅球表面氨基与多克隆 抗体的羧基之间的共价键联接，得到表面修饰荧光纳米颗粒的多克隆抗体，通过抗原抗体的特异性反 应，利用免疫组化技术，在子宫内膜石蜡病理切片上检测基质金属蛋 白酶组织抑制剂-4(Tissueinhibi— torofmetalloproteinases-4，TIMP4)蛋 白的表达． 1 实验部分 、 1．1 试剂与仪器 氯化钆(GdC1，，纯度99．9％)、氯化镱(YbC1，·6H：O，纯度99．9％)、氯化铒(ErC1 ·6HO，纯度 99．9％)、氟化铵(NHF，纯度96％)和 1一乙基一3一(3I~基丙基)一碳化二亚胺 (EDC，纯度 97％)均购 收稿 日期：2012-07—16． 基金项 目：吉林大学无机合成与制备化学国家重点实验室开放课题 (批准号：2012-07)资助． 联系人简介：崔满华，女，博士，教授，博士生导师，主要从事纳米材料肿瘤标记物及妇科肿瘤方面的研究 E-mail：cuimanhu