氨基肽酶抑制剂乌苯美司诱导人骨髓瘤细胞凋亡及其机制研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 氨基肽酶抑制剂乌苯美司诱导人骨髓瘤细胞 凋亡及其机制的研究 目 的 探讨氨基肽酶N抑制剂(CDl3抑制剂)乌苯美司在体外对人骨髓瘤细胞XG．1生 长抑制、线粒体膜电位以及诱导人骨简瘤细胞凋亡的作用及其作用机制。 方法 常规细胞培养，取对数生长期人骨髓瘤XG-1细胞，制成细胞悬液，按1．5x103／ 孔的密度接种，培养24 h细胞完全爬片后，乌本美司组加入500，1000p,g／ml的乌 本美司，空白对照组加入1640培养液。乌本美司作用24，48h后，用光学显微 h，48 h后的细胞，流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化：通过DNA片段原位末 端标记法(n州EL)检测凋亡细胞；SABC细胞免疫法检测细胞凋亡相关蛋白， 阳性表达并计算细胞凋亡率，统计学分析细胞阳性率与细胞凋亡率之间的相关性； 对实验数据进行统计分析。 结果 胞体积缩小，核质固缩，核膜核仁碎裂、溶解，胞质浓缩，出现典型的凋亡小体。 镜下空白对照组人骨髓瘤XG．1细胞呈圆或椭圆形，并呈聚集状态生长，分布均匀， 细胞膜完整、胞质透明清亮、细胞核一个或多个，形状大而圆，细胞生长状态良 好；细胞免疫组化显示人骨髓瘤XG．1细胞表面呈黄染，证实人骨髓瘤XG．1细胞表 h后 h过程中，凋亡 细胞凋亡率分别为(23．57+5．41)％，(58．35+8．45)％；在24--48 h后细胞凋亡率均为1％。线粒体跨膜电位的 的细胞逐渐坏死，空白对照组24，48 1．t 变化：Rhodaminel23染色结果显示，1000 h时线粒体膜电 g／ml乌苯美司作用24 位荧光强度的峰值在100～1000，平均荧光强度明显低于空白对照组 (135．53±15．09，223．37±13．82，P0．01)；作用48h时线粒体膜电位荧光 强度的峰值位于i0，-．100，平均荧光强度显著低于空白对照组(35．81±5．93， 221．36±24．79，P0．01)；凋亡相关蛋白的表达：500， 1000“g／ml乌苯美司 作用骨髓瘤细胞48 h后，凋亡相关蛋I刍caspase．3表达明显增高、Bcl．2表达则降低， 并分别与凋亡率呈正相关与负相关；细胞DNA损伤：1000 h I．tg／ml乌苯美司作用24 后，TUNEL法检测细胞凋亡可见细胞核中出现棕黄色颗粒，即为DNA受损标志。 结 论 乌苯美司在体外条下能够诱导人骨髓瘤XG．1细胞的凋亡，其诱导凋亡的机制 可能是通过诱导细胞发生DNA损伤，增加凋亡相关蛋I刍caspase．3的含量、降低细 胞凋亡相关蛋白Bcl．2的含量，从而干预线粒体跨膜电位实现细胞凋亡。 关键词 骨髓瘤XG．1细胞乌苯美司DNA损伤线粒体膜电位 凋亡相关蛋白 百士欣 2 ·英文论著摘要· Role inhibitorUbenimexinthe ofAminopeptidase Inductionof ofhuman cellLine