E3泛素连接酶基因CG4911敲除和功能的初步研究.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2012, 34(5): 439–446 http ://www.cj E3泛素连接酶基因CG4911敲除和功能的初步研究 1 1 1 2 3 2* 叶晓蕾　樊晓兰　王爽爽　张　岩　金龙金　林鑫华 1 2 ( 温州医学院眼视光学院, 温州325027; 中国科学院动物研究所生物膜与膜生物工程国家重点实验室、 3 干细胞与发育生物学重点实验室, 北京100101; 温州医学院检验医学院、生命科学学院, 温州325035) , 摘要 蛋白质的泛素化是一种重要的翻译后修饰过程 参与调控细胞周期、基因转录、信 号转导、炎症反应和干细胞的维持等过程。泛素连接酶E3(ubiqutin ligase)是泛素化过程中关键酶。 E3 , 但许多 基因在发育中的功能和作用机制还不明确。该研究以黑腹果蝇为模式动物 研究泛素连 接酶家族一个重要基因CG4911的功能及分子机制。获得CG4911基因敲除果蝇, CG4911敲除果蝇 纯合子可活。原位杂交结果显示, CG4911在胚胎发育早期表达。通过构建CG4911-pUAST-3HA重 Hela , CG4911 , , CG4911 组子转染 细胞 确定 定位于细胞质中 其表达并无修饰作用 并且过表达基因 可 CG4911 CG4911 导致背板发育缺陷。该研究首次获得了 基因敲除果蝇和 转基因果蝇, 并初步探索了 F-box CG4911 , 基因 的功能 为进一步阐明泛素连接酶的功能及分子机制提供了科学依据。 关键词 泛素连接酶基因; RNA干扰; 原位杂交; 果蝇 – (ubiquitin-proteasome sys- 450 , F-box , 泛素 蛋白酶体系统 码 个氨基酸 属于 结构域家族 与人类基因 tem, UPS)是真核细胞内选择性降解蛋白的主要途 FBXO33[8] 同源。体外细胞实验证实, FBXO33被认 , Skp-1/Cul1 YB-1 径 参与了多种细胞进程的调控, 包括调控细胞周 为与 一起参与转录因子 的泛素化过 期、基因转录、信号转导、炎症反应和干细胞的 程[9], YB-1在细胞周期调控中起着重要作用。在果 维持等[1-2] , CG4911 。待降解的蛋白在一系列酶的作用下被 蝇中 胚胎发生早期 表达明显, 定位于原肠 , E1[2](ub