从重组毕赤氏酵母中制备腺苷甲硫氨酸研究.pdf

壅塑塑型壁塑主巡!壁堡塑堑堕 一—』一 摘要 质，也是人体内一种重要的生理活性物质，可作为一种重要的药物。本实验室已 经构建了强化表达腺苷甲硫氨酸合成酶的重组Pichia pastoris酵母，使其能强化 积累SAM。在摇瓶发酵的基础上，本文探讨了中试发酵条件下，各重要发酵条件 对其SAM产量的影响，建立了能高产SAM的中试发酵条件，并且研究摸索出了 合适的分离SAM的下游工艺方法。 通过5一L工作体积发酵罐的发酵实验，研究了发酵中pH、溶解氧、加甘油和 甲硫氨酸等条件对细胞生长和SAM积累的影响。结果表明：重组菌在pH5．0时 生长比较旺盛，细胞生长进入稳定期后调节为pH6．0可以使重组Pichiapastoris 继续积累SAM。溶解氧低时SAM积累高于溶解氧高时SAM积累。优化发酵初 始甘油浓度为4％，并在发酵时流加甘油，有助于SAM的积累。前期加入一定量 的甲硫氨酸，发酵中继续流加补充，最后产量达到了4．39／L。 对发酵的菌体，采用了先用乙酸乙脂处理，后用酸处理的破胞方法，离心后 得到上清。选用不同的树脂做静态吸附及洗脱实验，根据结果吸附及洗脱能力选 用大孔弱酸胜阳离子交换树脂D151。用此树脂装柱来吸附SAM，根据试验，确 定了上清的上样量，上清的最适pH，上样的速度。采用分布洗脱的方法，先用水 洗去杂质，然后用O．1mol／L的硫酸溶液洗脱得到含SAM的洗脱液。再经过离子 交换树脂l×13．4脱盐、浓缩后、用正丁醇和乙酸乙脂的混合液沉淀SAM，最后 得到了SAM产品，其纯度达91．0％，且不易吸潮。 塑型查兰堕主堂垡笙苎 ．————————————L Abstract inthe metabolicintermediate important S-adenosyl．L．methionine(SAM)，all of in metabolic recombinant metabolicflux isinvolved sulphur many pathways．An wasobtained．Thefermentation ofSAM strainwhichcan level produceshigh was thatcaneffectthe andtheSAM studied． conditions growth yield microorganism of resinwas The Off SAMwith purification macroporouscompleted． experiment ThecultureconditionsoftherecombinantPichia infermentor(work pastoris volume intermsof