Ezrin%2fRadixin%2fMoesin蛋白在类风湿关节炎滑膜中表达及其对成纤维样滑膜细胞增殖影响.pdfVIP

Ezrin／Raflixin／Moesin蛋白在类风湿关节炎滑膜中的表达及其对成纤维样滑膜细胞增殖的影响 对成纤维样滑膜细胞增殖的影响 专 业：内科学(风湿免疫) 硕士研究生：黄红维 导 师：许韩师教授 中山大学附属第一医院 风湿免疫科 510080 中文摘要 研究背景 类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一种以关节滑膜慢性炎症性病变 为主要表现的全身性自身免疫性疾病，主要侵犯外周关节，病理表现为滑膜增生、 炎性细胞浸润、血管翳形成，软骨及骨组织侵蚀性破坏，最终导致关节结构破坏、 畸形和功能丧失。其发病机制目前尚未完全清楚，至今仍无根治方法。研究表明 类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(fibroblast—like 素依赖的“内源性通路及炎症因素介导的“外源性”通路活化后其细胞性质发 生改变，如上调粘附分子、整合素表达，激活转录因子，分泌产生多种炎性细胞 因子、基质会属蛋白酶、组织蛋白酶等有害因素，从而导致软骨和骨的破坏，在 RA的发病机制中扮演着极为重要的角色。 4．1超家族成员，最早作为细胞骨架蛋白和细胞膜的连接者被发现，已发现在多 种细胞和组织中表达，其分布有物种特异性和组织细胞特异性。近年研究表明， ERM除了作为细胞骨架蛋白和细胞膜的连接者外，还具有丰富的生物学功能， 参与细胞变形、渗透性改变、增殖、迁移以及凋亡的过程及其信号转导。 研究表明，RAFLS具有其他成纤维细胞不具备的特性，其细胞内存在多种 与细胞增殖和凋亡有关的基因变异，类似于肿瘤细胞。此外，已有研究发现RA FLS存在明显的细胞骨架重排现象，有学者认为此种现象可能参与RA的发病机 制，而细胞增殖和凋亡与细胞骨架重排、变构密切相关。据此，我们推测，作为 细胞骨架与细胞膜的连接者，E刚蛋白可能参与了RAFLS的增殖、凋亡、迁 移等生物学行为，但目前尚未见这方面的文献报道。为此，本文拟通过观察ERM Ezrin／Radixin／Moesin蛋白在类风湿戈节炎滑膜巾的表达及其对成纤维样滑膜细胞增殖的影响 及其磷酸化蛋白在RA滑膜组织中的表达，研究其是否参与调控FLS增殖和凋 亡的生物学行为，并探讨该过程中可能涉及的信号机制来阐明ERM及其磷酸化 蛋白在RA发病中的作用，以期为RA发病机制的研究和治疗提供新的思路。 第一部分ERM在RA滑膜组织和成纤维样滑膜细胞中的表达 目的 观察ERM及其磷酸化蛋白在RA滑膜组织和FLS中的表达。 方法 取符合美国风湿病学会类风湿关节炎诊断标准的RA患者行关节镜下滑膜 切除术所得的滑膜组织、符合美国风湿病学会骨关节炎诊断标准的OA患者行关 节置换术所得的滑膜组织、因外伤行关节修复术所得的正常人滑膜组织做细胞培 养和石蜡切片，用组织免疫荧光、组织化学、免疫印迹等方法观察ERM及其磷 酸化蛋白在滑膜组织和FLS中的表达，并观察TNF．a、IL．1B等炎症因子刺激对 RAFLS磷酸化ERM蛋白表达的影响。 结果 ERM三种蛋白在滑膜组织中均有表达，其中在RA滑膜组织中以ezrin最 次之，未见radixin表达；在正常人滑膜组织中ezrin的表达也较丰富。在滑膜组 织中， ERM蛋白主要集中分布于衬里层，但衬里下层也有少量分布，在RA滑 膜组织中尤为明显，主要见于浸润其中的单个核细胞。另外还可以观察到，在滑 OA和正常对照组滑膜组织均可观察到磷酸化ERM的表达信号，其分布类似于 ERM蛋白。与正常人和OA患者相比，RA患者滑膜组织的ERM及其磷酸化蛋 白表达明显增多。 在体外培养的RAFLS中，可以观察到ERM蛋白的表达同样以ezrin最丰富， 炎症因子TNF．0【、IL．1B呈剂量依赖性地明显上调磷酸化ERM蛋白表达，并且 FLS的磷酸化ERM蛋白表达量明显多 在相同浓度和时间的TNF．a刺激下，RA 于OAFLS和正常对照组。细胞免疫荧光显示TNF一0【除能上调磷酸化ERM表达 外，还影响其在细胞中的分布，刺激后磷酸化ERM主要分布在细胞膜，而基础 状念下则主要分布在细胞浆中。 结论 Il Ezrin