α1抗胰蛋白酶在胰腺癌中的表达及其临床意义.pdfVIP

主堡道丝盘查!!!i生!!旦筮!i鲞筮!!塑 ·短篇论著· 仪1一抗胰蛋白酶在胰腺癌中的表达及其临床意义 陈炯 陈龙江 武文 杨仁保 周杭城 胡立威 赵跃 马晓磊 AG3 胰腺癌起病隐匿、早期症状不明显、恶性程度高、早期 7，产物为77bp，荧光探针序列为5’一AAACCTCTC～ 诊断困难、手术切除率低、预后极差。因此，为了提高胰腺 TGAGCCCCA3。 癌的早期诊断率、全面反映肿瘤的分期和分级、评估疗效 3．Western印迹法检测：分别取组织置裂解液中充分 与改善预后，寻找有效的胰腺癌分子标志物显得十分必 匀浆、离心、收集上清液并测定总蛋白浓度。取各样品充 要。本课题组前期的蛋白质组学研究数据显示胰腺癌患 分变性后，经SDS，聚偏氟乙烯膜转膜、脱脂奶粉封 者血清中d1一抗胰蛋白酶(a1一antitypsin，al—AT)的表达水闭后加入适当稀释的一抗，室温孵育2h，充分洗涤；加入 平明显升高r11。本研究拟进一步验证前期结果并深入探 1：10 000的二抗，室温孵育1．5h；洗涤、显色、暗室中胶片 讨该蛋白在胰腺癌中的作用。 曝光、显影、定影后观察。 一、对象与方法 4．免疫组织化学法检测：切片常规脱蜡、水化，微波 1．研究对象与试验材料：收集安徽医科大学附属省 抗原修复后依次滴加3％H：O：和山羊血清封闭；滴加 立医院普外科2010年6月至2012年4月经病理证实的胰 1：200一抗4C过夜，随后依次加入二抗增强剂及辣根过 腺癌及相应癌旁组织(距肿瘤组织边缘2cm)各55份、慢氧化物酶(horseradish 性胰腺炎标本lo份。胰腺癌患者中，男32例，女23例；年 显微镜下滴加适量DAB溶液，终止反应后苏木精复染；常 龄37～76岁，中位年龄为60岁；胰头癌42例，胰体尾癌 规脱水、透明并封固。采用PBS替代一抗作为阴性对照。 13例；高分化14例，中、低分化41例；TNM分期I和Ⅱ期 采用半定量法判断结果口一，其中染色强度未着色为0分， 35例，Ⅲ和Ⅳ期20例；有淋巴结转移25例，无转移30例； 淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分；阳性细胞百分 所有患者术前均未进行抗癌治疗。同时收集该55例胰腺 癌患者和50名健康体检者的血清标本，采用El。ISA法检 1分；25％为0分。每张切片2项得分之和3分即定为 测a1一AT及CAl9-9。放射免疫沉淀测定细胞裂解液、BCA 阳性表达。 蛋白质定量试剂盒、三羟甲基氨基甲烷、过硫酸氨、丙烯酰 5．EI，ISA检测：取胰腺癌组及健康对照组血清样品， 胺购自美国SigmaAldrich公司，ECL超敏发光试剂盒购 按照EI。ISA试剂盒说明书依次检测血清样品中a1一AT及 自美国Pierce公司，兔抗人a1一AT抗体购自美国Santa CAl9—9，每个样品重复2次，于波长450nm处检测每个孔 Cruz公司，羊抗兔二抗和免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋 吸光度值(A值)，并计算样品浓度。 白一过氧化物酶连结法(streptavidin-perosidase，SP)染色试