第2节影响分离的因素与操作条件选择.pptVIP

* 第二章液相色谱分析法 一、影响分离的因素factors influenced separation 二、分离条件的选择choice of separation condition 第二节影响分离的因素与操作条件的选择 high performance liquid chromatograph factors influenced separation and choice of operation condition * 一、影响分离的因素 HPLC 与 GC 的主要区别在于流动相的的不同，液体的扩散系数只是气体的 1/104～105，ρ 密度为1000 倍左右。 1. 涡流扩散项 He 　　　He= 2λdp 　　意义与GC 完全一样，但要小得多。 * 2. 纵向扩散项 Hd 　　试样分子在柱内的纵向扩散同样能引起峰的扩展。 液体中的扩散系数比在气体中小4-5个数量级，因此，HPLC中纵向扩散对峰扩展的影响实际可以忽略。 在GC中的Hd是重要的。 * 3. 传质阻力项 　　分为固定相传质阻力和流动相传质阻力项。 （1）固定相的传质阻力项 可见与GC传质项含义一致，提高柱效应使用液膜薄而均匀的固定相。 取决与固定液膜厚度df及试样分子在固定液内的扩散系数DS。 * （2）流动相中的传质阻力项 在流动的流动相中传质 在滞留的流动相中传质 试样在流动相中的传质过程 在流动的流动相的传质阻力项 Hm 引起H 的变化，导致峰的扩展。 试样分子在柱内载液的u不是均匀 分子在柱内走的距离不一致 * 在滞留的流动相的传质阻力项Hsm 　　固定相的多孔性，使部分流动相滞留，试样分子要与固定相作用，必须自流动相扩散到滞留区。 　　由于固定相的孔既深又小，使传质减慢，使峰扩展，这种影响在整个传质过程中起主要作用。 固定相的颗粒越小，其微孔孔径愈大，深度越浅，传质越快，柱效越高。 * 二、提高柱效的途径 降低传质阻力是提高柱效主要途径，即降低固定相粒度可提高柱效。 HPLC中固定相及分离柱的制备性能是影响柱效的重要因素，一般很少自行制备。 柱外因素对色谱峰扩展的影响较大，由于u小，组分在连接管及检测器的死体积内会产生扩展。 由影响柱效的因素和速率方程可以得出提高柱效的途径如下： * 改变洗脱液组成、极性是改善分离的最直接的因素。 液相色谱中，通过柱温增加来改善传质效果不显著，实际分析中均采用恒温。 降低流速，柱效提高不显著，但实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间重要可选择参数。 -刘志广-