人卵巢癌细胞中IL18、ICE的基因及蛋白表达分析.DOCVIP

临床医学论文-人卵巢癌细胞中IL18、ICE的基因及蛋白表达分析 ????????????? 作者：崔澄 郝淑维 李保红 胡建军 张爱霞 程建新 单保恩 【摘要】? 　　目的 从基因转录及蛋白表达水平检测白细胞介素18（IL18）、白细胞介素1β转化酶（ICE）在人卵巢癌细胞株SKOV3和3AO中的表达。方法 分别采用RTPCR及免疫细胞化学染色法检测SKOV3和3AO中IL18、ICE的mRNA及蛋白表达。结果 SKOV3和3AO中IL18 mRNA及蛋白表达均阳性，其中SKOV3的mRNA表达量显著高于3AO（分别为0.32±0.09、0.17±0.04，P=0.009）；而ICE mRNA及蛋白表达均阴性。结论 人卵巢癌细胞株SKOV3和3AO在基因及蛋白水平表达IL-18，但缺如ICE表达的特点，可能与卵巢癌的发生发展有一定的关系。 【关键词】? 人卵巢癌； SKOV3； 3AO； IL18； ICE ??? 【Abstract】? Objective? To study the expressions of interleukin 18 (IL18) and interleukin 1β converting enzyme (ICE) in human ovarian cancer cell lines (SKOV3 and 3AO) from the levels of gene and protein. Methods? The levels of their mRNA and protein were determined by RTPCR and immunocytochemistry staining, respectively. Results? IL18 mRNA and protein were expressed positively in SKOV3 and 3AO, and its mRNA level in SKOV3 was higher than that in 3AO（0.32±0.09 VS. 0.17±0.04，P=0.009）. But ICE mRNA and protein were negative in both of them. Conclusion? Human ovarian cancer cell lines SKOV3 and 3AO had mRNA and protein expression of IL18 but no ICE. Perhaps, these have certain relationship with the occurrence and development of ovarian cancer. ??? 【Key words】? Human ovarian cancer； SKOV3； 3AO； IL18； ICE ??? IL18是近年来发现的具有抗肿瘤作用的细胞因子，常以非活性前体方式存在，只有经白细胞介素1β转化酶（interleukin 1β converting enzyme, ICE）剪切后，才能发挥生物学活性［1-4］。已有研究证实，正常人体多种组织及细胞中有IL18及ICE表达，而某些肿瘤组织中ICE的表达降低或缺如［5］，但有关卵巢癌细胞IL18、ICE的表达与卵巢癌发病之间关系的研究目前尚鲜见报道。因此，本研究从基因转录及蛋白水平分析IL18、ICE在卵巢癌细胞株SKOV3和3AO中的表达情况，初步探讨其在卵巢癌发生发展中的作用。 ??? 1? 材料与方法 ??? 1.1? 细胞及主要试剂? 人卵巢癌细胞株SKOV3、3AO（由河北医科大学第四医院科研中心提供）；胎牛血清（杭州四季青公司产品）；RPMI1640及胰蛋白酶（美国GIBCO公司产品）；兔抗人IL18、ICE抗体（购自武汉博士德公司）；通用型SP2001免疫组化及DAB显色试剂盒（购自北京中杉金桥公司）；Trizol试剂（美国GIBCO公司产品）；RTPCR试剂盒（购自华美生物工程公司）。 ??? 1.2? 引物设计与合成? βactin、IL18及ICE引物序列查自GeneBank，经Premier 5.0引物设计软件分析核对，由上海生工生物技术有限公司合成。 ??? IL-18（147 bp） ??? P1：5-AAGACCAGCCTGACCAAC-3 ??? P2：5-ACCACAACCTCTACCTCC-3 ??? ICE（383 bp） ??? P1：5-CTCAGGCTCAGAAGGGAA-3 ??? P2：5-CTGGGACTTGCTCAGAGTGTTT-3 ??? βactin(838 bp