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磁性微球用于乳糖酶的固定化研究 食品科学专业 研究生李黎 指导教师马力 磁性高分子微球是最近发展起来的一种新型功能高分子材料，它是有机一 无机纳米复合粒子，具有磁性，在外加磁场作用下很容易进行分离和磁性导向， 现作为酶、细胞、药物等的载体被广泛地应用到了生物工程、细胞学和生物医 学等领域。将壳聚糖和磁性纳米粒子结合制各磁性壳聚糖微球，具有重要的学 术意义和应用价值。磁性壳聚糖微球因其表面具有与生物活性物质反应的活性 羟基和氨基，可被广泛用于生物活性物质的载体，同时又因其具有磁性，在外 加磁场作用下能快速分离，使原来昂贵、低效的分离技术变得低廉、高效。本 文选用壳聚糖制备的磁性微球作为固定化乳糖酶的载体材料。固定化的乳糖酶 可以重复回收使用，既节约酶的消耗量，又为自动化生产管理提供了便利的条 件。 本论文主要包括以下三个方面的内容： 以氯化亚铁、氯化铁、氢氧化钠为主要原料，采用化学共沉淀法合成了Fe304 磁性粒子，并对Fe304粒子的平均粒径、分散稳定性、相对磁性大小进行了测试 与表征。用正交设计法优化了Fe304微粒的合成工艺条件，得到制备Fe304粒子 电镜图可以看出，Fe304微粒晶体颗粒为纳米级。 醛为交联剂，采用反相悬浮交联法制备磁性壳聚糖微球(M．CS)，探讨了交联 时间、反应温度、壳聚糖浓度、Fe304／CS质量比、戊二醛用量、分散介质用 量等因素对磁性壳聚糖微球性能的影响，并对其形态、粒径、分散性、磁响应 性进行了初步表征。磁性壳聚糖微球在外加磁场下具有强磁性能，在自然状态 下具有良好的悬浮稳定性。壳聚糖与Fe304纳米粒子形成的复合微粒呈球状，纳 米粒子被包裹在微球内，为核壳结构，且微球表面较平滑，单分散性好。制备 的M．cs粒径介于l¨m～15岬l之间，该粒径利于微球在反应体系中分散和磁分 离。 将磁性壳聚糖微球(M．CS)用于乳糖酶的固定化。考虑加酶量、磁性微球 本身的性质、缓冲液的pH值、固定化时间对固定化效果的影响，确定了最佳固 定化条件。与游离酶相比，固定化酶有更宽的pH适用范围；游离酶的最佳催化 温度为40℃，固定化酶最佳催化温度为45℃，比游离酶提高了5℃，固定化后的 乳糖酶的温度耐受性有所提高；固定化后的乳糖酶的米氏常数比游离酶下降， 说明乳糖酶在固定化后其结合底物的能力有所增强；固定化酶反复使用5次后， 酶活仍保持了65％以上；乳糖酶被固定化后，其贮存稳定性也有所提高。 关键词：磁性微球，固定化酶，乳糖酶，壳聚糖 ontheImmobilizationofLactase Study on Microspheres Magnetic Science Specialty：Food Li Li Postgraduate：LiSupervisor：Ma thathasbeen isanovelfunctionalmaterial Magneticpolymermicrosphere anditisakindof developedrecently organic—inorganiccompoundnanoparticle， which oriented has andcallbe and under magnetism separated easily applied field．Asthecarrierof and callbe