膜蛋白p185胞外区表达和性质鉴定Hecl基因肿瘤细胞中转录调控研究.pdfVIP

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2017-09-09 发布于安徽
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膜蛋白p185胞外区表达和性质鉴定Hecl基因肿瘤细胞中转录调控研究.pdf

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第一部分膜蛋白p185胞外区表达和性质鉴定摘要家族的一员，在约30％的乳腺癌中发现了其过量表达。为了鉴定抗p185单克隆抗体的抗原表位并进一步研究它们的相互作用，我们采用PCR的方法从含因。利用哺乳动物细胞，酵母和大肠杆菌等表达系统对p185胞外区做了尝试性表达。在大肠杆菌系统中，可溶性表达了P185胞外富含二硫键区。采用的方法是：PCR产物克隆到pGEXJ4T-1载体后，转化大肠杆菌OrigamiB(DE3)plyrsS 菌株，用低浓度IPTG进行低温过夜诱导后将菌体压力破碎，SDS．PAGE检测表达上清，得到了可溶性表达的融合有GST的目的蛋白。经ELISA，Westernblot 等方法鉴定，该融合蛋白具有良好的空间结构和完全的抗体结合活性，且当用凝蛋白。p185胞外区融合蛋白的成功表达将为二硫键富含类蛋白的表达提供参考；并为将来具有肿瘤细胞生长抑制活性的抗p185单克隆抗体的抗原表位鉴定，以及为EGFR家族受体的结构和功能关系的研究打下基础。 Abstract Transmembranel ofHer2／c—erbB一2 amember proteinp85(theproduct gene)is ofthe factor epidermal was growthreceptor(EGFR)family．Itsoverexpression foundinabout30％ofbreastcancer．ItiS essentialtoobtainsoluble extracellular 1 disulfidebondrich domain(ECD)of P85，especially domains， for the of antibodiesand the identifying epitopesanti—p185 researching between the and full and interrelationshipantigen antibody．Thelengthgene fromdifferentdomainsof185ECDwere from genes p amplifiedplasmid PCR these were tobe pBabe／erbB一2by respectively．Then genes attempted inmammalian andE．coli．Thetwodisulfidebondrich expressed cells，yeast I-IIanddomain insertedinto domains(domain IV)were pGEX／4T-1vectoL transfectedintoE．coli and OrigamiB(DE3)plysS