Intein介导的重组昆虫毒素Bm K IT在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及活性分析.pdfVIP

维普资讯 23卷 6 期 生 物 工 程 学 报 Vo1．23 No．6 2007年 11月 ChineseJournalofBiotechnology November 20o7 Intein介导的重组昆虫毒素 BmKIT在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化 及活性分析 SolubleExpression，Purification and Characterization of BmK IT in EscherichiacolibyIntein--mediatedSystem 许成钢，范晓军，张志云，付月君，梁爱华 XU Cheng-Gang，FANXiao—Jun，ZHANG Zhi—Yun，FuYue—JunandLIANGAi—Hua 山西大学生物技术研究所 ，化学生物学与分子工程教育部重点实验室，太原 030006 KeyLaboratoryofChemicalBiologyandMolecularEngineeringofMinistryofEducation，InstituteofBoitechnoloyg ，ShanxiUniversity，Taiyuan030006，China 摘 要 为获得重组蝎 昆虫毒素 BmKIT，通过 PCR方法在 BmKIT基因的3端融合 了编码 6个组氨酸残基的核苷酸序列，将 其插入原核表达载体 pTwIN1的内含肽 SspDnaBIntein基 因下游的多克隆位点(MCS)。将获得 的表达质粒转化大肠杆菌 BI221 (DE3)中，用IPTG诱导融合蛋 白表达 。用 Ni—NTA亲和层析柱从茵体裂解液 中纯化 了CBD—Intein—BmKIT‰融合蛋 白，并在柱上 诱导Intein自剪切 ，成功去除融合子CBD—Intein。通过Superdex75凝胶过滤层析获得 了纯度达95％以上 的BmKIT 蛋白，该蛋 白不仅具有正确 的二级结构而且有生物活性 。 关键词 东亚钳蝎 昆虫毒素，原核表达 ，Intein 自剪切 。虫试实验 中图分类号 Q786 文献标识码 A 文章编号 1000—3061(2007)06—0989—06 Abstract ToproducerecombinantButhusmartensiiKarschinsecttoxin(BmKIT)，BmKITcDNAwhichfusedahexahistidine sequenceattheC—terminusbyPCRwasinsertedintopTWIN1expressionvectorfusedinframewithanupstream SspDnaBintein gene．TheexpressionplasmidwastransfomredintoE．coliBL21(DE3)strainandproteinexpressionwasinducedbyIPTG． TheCBD—Intein—BmK IThj击 fusionproteinwaspurifiedfrom celllysatesusingNi—NTA resinaffinitychromatography．Theintein wasremoved from fusion proteinbyon-column intein—mediated cleavage．BmK IThi waspurified through Superdex75 gel chromatography to morethan 95％ homogeneity．Th e purified protein hasboth correctsecondary structure and insecticidal activity． Keywords ButhusmartensiiKarschinsecttoxin(BmKIT)，prokaryoticexpression，inteinself—cleavage，insectbioassay 蝎毒素主要是一些多肽类物质 ，一般含有 30～ 作用于昆虫而对哺乳动物无