ICBP90表达及其对胆囊癌细胞化疗敏感性影响研究.pdf

上海交通大学硕士论文 中文摘要 ICBP90 表达及其对胆囊癌细胞化疗敏感性影响的研究 摘 要 目的 通过检测生长抑素作用后胆囊癌细胞内ICBP90 蛋白表达的变 化，探讨生长抑素增强胆囊癌细胞对阿霉素化疗敏感性的分子机制。 方法 （1）选取人胆囊癌细胞株GBC-SD ，常规体外培养，并验证 其成瘤性及病理组织类型；GBC-SD 细胞分为4 组：单独生长抑素作用 组、单独阿霉素作用组、联合用药组（生长抑素预处理24h 后，再加入 阿霉素）和对照组。（2 ）在药物作用24h ，48h ，72h 和96h 后，采用MTT 方法检测各组细胞生长曲线。（3 ）在药物作用24 ，36，48 和60h 后，采 用Annexin V/PI 方法分别检测各组细胞的凋亡情况；（4 ）在生长抑素作 用12、24 、36 和48h 后，采用流式细胞仪检测GBC-SD 细胞内DNA 的 含量，确定各时间点细胞所处周期。（5 ）采用western blot 方法检测在生 长抑素作用12、24 、36 和48h 后GBC-SD 细胞内Rb 、E2F-1 、ICBP90 和Topoisomerase Ⅱα各蛋白的表达变化，以及在生长抑素作用24 后 GBC-SD 细胞内P53 和Bax 蛋白表达的变化。 结果 （1）GBC-SD 细胞在体外常规培养，生长旺盛；裸鼠接种4 周后可见明显荷瘤，病理切片镜下见腺癌组。（2 ）对GBC-SD 细胞联合 上海交通大学硕士论文 中文摘要 应用生长抑素和阿霉素，可明显抑制胆囊癌细胞的生长，并呈现浓度-效 应依赖关系，对癌细胞的杀伤作用明显强于单用阿霉素组（P0.05 ）。（3 ） 联合用药组和单独阿霉素作用组出现明显的细胞凋亡（P0.05 ），而且细 胞凋亡具有时间依赖性的，其中联合用药组的细胞凋亡更显著（P0.05 ）； 而单独生长抑素组却没有出现明显的细胞凋亡（P0.05 ）。（4 ）在生长抑 素作用后，GBC-SD 细胞出现明显的S 期阻滞（P0.05 ），并且S 期细胞 比例在24h 达到高峰，随后逐渐降低。（5 ）生长抑素作用12h、24h 和 36h 后，各蛋白表达变化情况如下：Rb 和E2F-1 蛋白表达增多，在12h 达到高峰（P0.05 ）；ICBP90 蛋白的表达增多，在24h 达到高峰（P0.05 ）； 而Topoisomerase Ⅱα蛋白的表达也增多，在24h 达到高峰，随后保持一 平台（P0.05 ）。另外，生长抑素作用24h 后，P53 和Bax 蛋白的表达无 明显变化（P0.05 ）。 结论 生长抑素增强阿霉素对胆囊癌细胞的杀伤作用，并非是由生长 抑素与阿霉素本身的细胞毒性作用叠加所致，而与生长抑素影响胆囊癌 细胞的周期和细胞内Topoisomerase Ⅱα蛋白的表达有关。生长抑素诱导 胆囊癌细胞发生S 期阻滞，可能与其改变细胞内Rb 、E2F-1 蛋白的表达 有关；而Topoisomerase Ⅱα蛋白表达的增高则与生长抑素诱导ICBP90 蛋白的上调有关。 上海交通大学硕士论文 中文摘要 关键词: 胆囊癌，化疗敏感性，生长抑素，细胞周期，ICBP90 上海交通大学硕士论文 英文摘要 RESEACHES ON THE EXPRESSION OF ICBP90 AND ITS EFFECTS ON CHEMOSENSITIVITY OF GBC-SD CELL LINE ABSTRACT Objective To investigate underlying molecule mechanism of somatostatin enhancing chemotherapy sensi