高浓度砷耐受菌分离鉴定、耐受特性研究及AsⅢ氧化基因工程菌构建.pdf

摘 要 工业排放的高浓度含砷废水对环境和人类健康造成了极大的危害，如何降低 含砷废水的毒性并最终将其脱除成为我们迫切需要解决的问题。As(III)幂lAs(V) 倍以上，且当pH9．2，As(III)的存在形式呈电中性，其吸附结合能力较弱。因此， 处理含砷废水的时候，通常需要通过预处理将剧毒As(III)氧化为毒性较低的 As(V)后再将其脱除，而常规的通过化学氧化剂氧化As(III)的方法不仅成本高， 而且容易产生二次污染，常规的物理化学脱除技术也存在同样的问题。针对目前 砷污染治理的现状，研究更加清洁的高浓度含砷废水的治理新技术，对保护水环 境、保障饮用水安全具有重要意义。本文从砷污染环境中筛选了一株能耐受高浓 度砷的菌株，分别对其进行了生物学特性、As(III)氧化及砷吸附特性方面的研究， 并在此基础上构建了As(III)氧化基因工程菌应用于含砷废水的预处理。主要研究 内容包括以下几个方面： 高浓度砷耐受菌株的分离、鉴定和生长特性研究。生物法处理高浓度含砷废 水的首要条件是获得能耐受高浓度砷的菌株。本文从南京某研究所废水中筛选获 差，对铅的耐受浓度较高；考虑到微生物对重金属耐受性形成的一个可能机制是 对重金属离子的生物吸附作用以及沉淀结晶作用，本文通过扫描电镜发现菌株 AS．01加砷培养后细胞壁表面出现少量絮状沉淀，红外光谱分析发现—oH以及 酰胺基团可能是细胞表面结合砷的官能团。通过质粒消除实验发现该菌株的耐砷 性质与耐性质粒的存在有关，其耐砷基因可能存在于质粒上。 对该菌株生长特性的研究发现其最适生长温度为30C，最适pH为6，是一 株好氧生长菌；对菌株进行了较为系统详细的鉴定、抗菌谱的研究，发现菌株 16S 苄外，菌株对其他抗生素都很敏感。 摘要 对As(III)氧化特性的研究表明其在pH6，温度30℃的最佳条件下，氧化率仅为 28．6％。鉴于菌株的原始氧化率较低，本文首先采用较为简单快捷的紫外诱变育 别提高到39．40％和36．91％。正突变株传代培养后发现氧化率较高的9号突变株 稳定性较强，经8次传代，As(HI)氧化率依旧与未传代前持平，而19号突变株 氧化稳定性较差，经4次传代，氧化率就下降了21．2％。 考虑到生物吸附作用的存在，考察了菌株对两种不同形态砷的生物吸附效 3．9％和l5．8％。 As(In)氧化基因工程菌的构建及性质研究。利用基因重组技术在耐砷菌 AS一01的基础上，引入外源基因进行表达，得到既能耐受高浓度砷又能高效氧化 HB8细胞液提取大小为300kb As(m)的基因工程菌。本文从Thermusthermophilus 氧化率的测定结果表明原始菌对As(III)的氧化率仅有29．8％，而重组基因工程菌 对As(111)的氧化率达到87．6％，对重组菌和野生宿主菌亚砷酸盐氧化酶酶活测定 DCIP 发现了一致的结论。菌株AS．01原始亚砷酸盐氧化酶比酶活为0．451．tmol of DCIP reduced／ reduced／min／mgprotein，而基因工程菌比酶活为3．621．unol of min／mgprotein，经基因重组后的工程菌其亚砷酸盐氧化酶酶活得到了明显的 提高。工程菌培养过程中庆大霉素的选择压力是维持质粒稳定性的重要因素；基 因重组对宿主菌AS-01的耐砷水平影响不大，考察了pH及温度对基因工程菌 As(HI)氧化率的影响，pH6．0，温度30C为工程菌As(HI)氧化的最佳条件。 关键词：砷废水微生物基因工程菌耐受氧化 Ⅱ 博士学位论文 ABSTRACT Arseniccontaminatedwastewater madea harmOil