聚氨酯泡沫半固定化培养盘基网柄菌的研究.pdfVIP

浙江大学硕十学衍论=。=携要 摘要 盘基网柄菌(Dictyostelium 界的聚粘霉属(Acrasiomzcetes)。作为异源蛋白表达系统，盘基网柄菌N-。O． 糖基化机制与高等真核生物很相似，且培养过程不需添加血清等特殊成分， 成本低廉。但盘基网柄菌在复杂培养基中的悬浮培养密度只能达到 1-2x107mrl，且生长速度较慢，这严重影响了盘基网柄菌表达系统的应用。 本文采用聚氨酯泡沫半固定化的方法培养盘基网柄菌。通过分析盘基网 柄菌在聚氨酯泡沫载体中的固定化情况，菌体在载体中的分布情况以及电镜 扫描结果，确定聚氨酯泡沫载体与菌体有良好的生物相容性并能有效的吸附 固定盘基网柄菌细胞。通过实验进一步研究了转速，载体添加量及载体尺寸 等因素对盘基网柄菌在聚氨酯泡沫载体中固定化的影响。 通过考察载体密度、载体尺寸、载体量和摇床转速等因素对菌体固定化 培养的影响，优化了聚氨酯泡沫半固定化培养盘基网柄菌的条件，添加饼状 聚氨酯泡沫1．09，22．23℃，150rpm条件下固定化培养盘基网柄菌，在115 小时左右，载体内菌体密度达到4．56xi07ml-1，为悬浮培养的2-4倍。通过 分析比较悬浮培养及固定化培养条件下的菌体的生长曲线，发现采用聚氨酯 泡沫固定化培养法，菌体生长速度没有受到明显影响。 最后，对本实验室构建的引入6-his标签的人FasL重组盘基网柄菌表达 产物进行了分离纯化。结果显示，该重组菌可以有效的表达人FasL。经过一 步金属亲和层析，得到纯度为92．1％的重组蛋白，分离回收率为91．0％。 关键词：盘基网柄菌，聚氨酯泡沫，固定化培养，FasL，纯化 IV 浙江★学碲+学付论立 摘1真 ABSTRACT Thecellularslimemould to DicCyostelium Acrasiomzcetes．Itshows characteristicsasall for promising expressionsystem the ofrecombinant to awhole production glycoproteinowingperform spectrum of modifications．Thesemodificationsarenot post-translational completely of identicaltothosemammalian cells，butsimilar．However,the quite application as ofthis is affectedslow rateaswelllowmaximal systemseriouslyby growth cell densitiy． in TheimmobilizationofD．discoideumwithPUFWas the proposed