小鼠甲状腺细胞原代培养及鉴定.pdfVIP

维普资讯 · 620· 生国地方病学杂志2007年 l1月20日第26卷第6期 ChinJEndemio1．Nov20．2007．Vo1．26．N0．6 · 实 验 研 究 · 小鼠甲状腺细胞原代培养及鉴定 刘泽兵 臧晓怡 于秀杰 李庆欣 李兰英 陈祖培 摘【要】 目的 分离培养小鼠甲状腺细胞，为探讨甲状腺功能调节和疾病发生提供一种体外模型。方法 取 6～8周龄 Balb／c小鼠甲状腺 ，用胶原酶一中性蛋 白酶双酶法分离 甲状腺滤泡上皮细胞 。用含 10％胎牛血清 (FCS)的F一12培养基培养，细胞贴壁后FCS降至5％，另外添加促 甲状腺激素 (TSH)、氢化可的松、转铁蛋白、 胰 岛素和 L．谷氨酰胺 。光镜下对不同培养时间的细胞进行形态学观察，并结合免疫细胞化学染色法、RT—PCR 法和电化学发光免疫法对培养小鼠甲状腺细胞从形态、甲状腺球蛋 白( )、 特异抗原蛋 白表达 、甲‘状腺过氧 化物酶(TPO)、钠碘转运子 (NIS)、促 甲状腺激素受体(TSH—R)等特异基因mRNA表达和甲状腺激素 L、T4分泌 功能等方面进行鉴定。结果 小鼠甲状腺细胞在体外呈贴壁式生长，具有上皮样细胞特点 ； 染色呈胞浆阳 性 ，并具有特异TPO、Tg、NIS、TSH—RmRNA表达和分泌 L、T4的功能，但其表达与分泌量有随培养时间的延长 呈递减趋势。结论 成功建立小鼠甲状腺细胞原代培养模型，可用于甲状腺功能与疾病研究。 【关键词】 甲状腺； 原代细胞培养； 小鼠； 鉴定 Primarycultureandidentificationofmousethyroidcells LIUZe-bing，ZANGXiao-yi，YUXiu-jie，LIQing- xin，LILan-ying，CHENZu-pei- InstituteofEndocrinology，TianjinMedicalUnwem ，Tianjin300070，China Correspongdingauthor：LIQing-xin，Email：zangxy080@163．com A【lmtraet】 Objective Toisolateandculturemousethyroidcellsaftanoveln／vtiromodelforstudying thyroidpahtophysiology．Methods Thyroidswere excisedfrom 6 ～ 8week-oldBALB／cmicenad digested with enzymestoo~ainthyroidfollicularcellswhichwere culturedinF一12medium supplementedwiht 5％ ～10％ FCSand containingthyrotropin (TSH)，insulin，hydrocortisone，trnasferrin，L-Glutamicacid．Thyroid specificantigen htyroglohulin(Tg)expressionwasdetectedbyimmunohistochemicalstaining．Theexpressionofthyroidperoxidase (TPO)，thyroglobulin(Tg)，sodium／iodidesymporter(NIS)，nadTSH—receptoras wellas secretionof thyroid hormonesby culturedcellswere assessedbyRT—PCRandelectro—chemiluminescenceimmunoassay(ECLIA)， respectively．Results Th ecultured cellsshowed htecharacteristicsof attached epihtelial—like cellsand strong cytoplasmicstainingofrTg．Th ecellsexpressedTPO，Tg，NISna dTSH—R atmRNA levelsandwere ableot release