禁食对氯仿染毒大鼠代谢和肝毒性影响的研究.pdf

中 文 摘 要 禁食对氮仿染毒大鼠代谢和肝毒性影响的研究 摘 要 目的:氯仿((CHCL3)是工业上广泛使用的强挥发性有机 溶剂以及化工合成原料，是一种常见的环境污染物，同时也 是饮用水氯化消毒主要的副产物。氯仿可经消化道，呼吸道 和皮肤接触进入机体。高剂量氯仿能抑制中枢神经系统，造 成肝肾功能损害、甲状腺机能的改变及肿瘤。高浓度直接接 触氯仿也可引起局部皮肤的损伤。同时，氯仿对机体免疫功 能、生殖系统均能造成不同程度的损害。在氯仿导致的肝毒 性机理方面进行的广泛研究表明，氯仿在肝脏中经细胞色素 P450酶代谢产生活性代谢产物碳酞氯，能与细胞内大分子共 价结合，最终导致细胞损伤。然而，任何影响氯仿代谢的因 素都可能改变氯仿的肝毒性。 热量限制在动物实验中被发现具有延缓衰老、延长生命 周期和降低自发性与化学物质诱导的肿瘤发生率。已知整夜 禁食对体内细胞色素P450(CYP450)酶系中的CYP2E1活性 有诱导作用。CYP2E1的特点是对包括氯仿在内的低分子有机 化合物等挥发性物质具有高度亲和力，通过生物转化可使这 些化学物质毒性发生改变。 给药途径也可能是氯仿肝毒性的另外决定性因素，因为 它可能会影响氯仿在体内的生物转化、吸收、分布和排泄。 本课题拟通过不同剂量下氯仿经口给药、腹腔注射以及吸入 染毒，研究禁食对氯仿代谢和肝毒性影响，探讨肝脏酶诱导 的剂量依赖作用，为禁食对毒物在体内的毒性及代谢改变的 中文 摘 要 研究提供理论和实践上的参考。 方法:选用8周龄Wistar雄性大鼠，正常喂养至10周 龄时，随机分为2组，每组65只，第一组 (禁食组)整夜禁 食，大鼠从实验前一天下午16:00时禁食至实验当天上午10- 00时，期间仅喂水;第二组 (喂养组)正常喂食。 禁食对肝脏微粒体蛋白、CYP450含量及体外氯仿代谢 影响的测定:取禁食组和喂养组大鼠各 5只，断头处死后切 除肝脏，用磷酸缓冲溶液配置25% (w/v)肝组织匀浆，离心 后测定GSH含量:其余部分进一步离心，并与缓冲液再次缓 冲后按照Lowry方法测定其蛋白成份保存备用。 微粒体蛋白含量和CYP450酶含量按照Omura方法进行 分光光度测定。并用Sato和Nakajima平衡测定法，通过酶底 物消失率的改变，定量体外氯仿代谢。 氯仿给药:取禁食组大鼠60只，随机分为12个小组， 1-4组分别吸入。，50,100,500ppm氯仿气体6小时，5-8 和 9-12组分别经口和腹腔注射给药，给予 0,100,200, 400mg/kg氯仿，24小时后进行指标测定。喂养组60只大鼠同 步操作，方法相同。给药大鼠在实验当天16:00时开始持续喂 食、喂水。 指标测定:从鼠尾采血20P1，用Satoetal气相色谱方 法，测定血液中氯仿浓度口 生物化学测定:用Ellman方法测定经氯仿染毒24小时 后大鼠肝脏GSH含量，用速率法测定血清中GOT和GPT含 量。 结果 1.禁食对氯仿体外代谢的影响:与正常喂养组相比，禁 中文 摘 要 食使氯仿代谢率明显增加 (P0.05)，但是对肝脏微粒体蛋白 和CYP450含量没有显著影响。 2.禁食对氯仿血液动力学的影响:经吸入给药，当吸入 氯仿气体浓度达到500ppm时，禁食对氯仿毒物动力学产生影 响，经口和腹腔注射给予氯仿，不同剂量组经口给药均比腹 腔注射血液中氯仿浓度低，经口给药小剂量 (100mg/kg)和 中等剂量 (200mg/kg)时，禁食组与喂养组血液中氯仿浓度 均有显著性差异 (P0.05)，但大剂量时则没有显著性差别， 而腹腔注射只有在注射剂量为中等剂量 (200mg/kg)时，禁 食才对氯仿毒物动力学产生影响。 3.禁食对氯仿肝毒性的影响:禁食增强了氯仿的肝毒性。 但毒性增强程度因给药途径不同而不同。以吸入方式给药， 毒性随给药浓度增强而明显增强。相同剂量下经口给药和腹 腔注射比较，禁食大鼠氯仿经口给药比腹腔注射导致更为严 重的肝损害，而且毒性的剂量一反应关系有明显差别。禁食大 鼠经口给