雷公藤内酯醇固体脂质纳米粒的制备及作用研究.pdf

摘要 是雷公藤中的主要有效成分之一。由于雷公藤的生理活性强，具有显著的抗炎、抗肿 瘤、抗生育及免疫抑制作用。但同时又属于毒性很强的药物，其临床不良反应的发 生频率远高于其它药物。主要发生在消化系统、泌尿系统、生殖系统、心血管系统、 骨髓及血液系统，其中又阻消化系统最为常见，如：恶心、呕吐、腹痛、腹泻及消 化道出血等。因此，研究新型给药系统来降低其毒性具有十分重要的意义。本论文 选择了毒性较低、体内可以降解且有良好生物相容性的天然脂质材料作为药物载体 制成雷公藤内酯醇固体脂质纳米粒(TP．SLN)，以期达到降低药物毒副作用，提高疗 效的目的。完成的工作包括以下几个方面。 1．通过所制各脂质纳米粒分散液的透光率，筛选出适用于本体系的“乳化超声”分 散法作为制备脂质纳米粒的方法，并通过单因素分析考察了制备过程中各因素对纳 米粒粒径和包封率的影响。实验结果表明PEG400MS、硬脂酸的用量和超声时间对纳 米粒粒径的影响较大；硬脂酸、PEG400MS的用量和制备温度、超声功率对包封率的 影响较大。采用4因素3水平正交设计，以粒径变化和包封率为指标对硬脂酸纳米 粒的处方和制备方法进行了优化，得到了适用于TP—SLN的最佳处方和制各方法，其 粒径为123．4±0．9nm，Zeta电位值．45mV。 2．采用改进的Franz扩散池体外渗透实验，比较了不同脂质、乳化剂和辅助乳化剂 所制得的SLN体系的经皮渗透作用，研究了它们对角叉菜胶和Freund’s完全佐剂所 致的大鼠佐剂性关节炎的作用。结果发现，在12h内累计透皮吸收百分率以处方B 最高，达到了78．5％，而普通溶液为32．4％．TP．SLN局部及口服给药对角叉菜胶和 Freund’s完全佐剂所致的佐剂性关节炎有较强的作用，SLN的粒径越小，抗炎活性 越强。还发现，TP．SLN能明显降低血清中IL．1B水平。通过本文的研究表明了 TP—SLN作为透皮给药，可以延缓药物的释放。提高药物疗效。 3．研究了TP—SLN的急性毒性和亚急性毒性。用TP．SLN小鼠灌胃30d后，测定小 嫠蒜。饿 量，另外还对肝、肾、脾及睾丸等组织进行免疫组化和病理学检查，以及不同组织 BUN、Cr的含量升高；维织病理学检查和琼脂糖电泳发现，TP对小鼠肝、肾、睾丸 等组织的损伤较大，而TP．SLN对肝、肾等组织损伤较小。相比之下，二者对脾脏 均无影响。结果表明TP—SLN能降低TP对肝、肾等组织的毒性，在～定程度上降低 对睾丸的毒性。 4．采用核磁共振技术研究雷公藤内酯醇及其固体脂质纳米粒对大鼠尿液中代谢产 物变化的影响，并进行组织病理学检查进一步证实NMR的结果。TP—SLN和TP组大鼠 灌胃给药15天后发现，尿样NMR图谱中尿囊素浓度均降低，但TP组更为明显，其 尿囊素峰很弱，尿素峰消失。TP组中的N一氧三甲胺(TMA0)峰显著降低，并且出 现了对照组尿液中没有的二甲基氨(DMA)；马尿酸、苯丙氨酸、色氨酸的浓度均降 大，但TP组肌酸酐的浓度显著的降低，而TP—SLN组几乎无变化。这些结果表明TP 肝脏的毒性，可在一定程度上降低TP对睾丸和精子的损伤。 5．采用生长曲线法、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术以及溴化丙啶染色等方法，研究 细胞凋亡的作用明显优于TP，琼脂糖凝胶电泳显示TP．SLN作用的细胞株出现明显 的“梯带”。这对于进一步开发TP的抗肿瘤作用具有重要的意义。 关键词：雷公藤内酯醇固体脂质纳米粒药理作用毒性核磁共振细胞凋亡 4 Abstract Triptolide(diterpenoid ofatraditionalChinese tfiepoxide，TP)，apurified component isolatedfromashrub—likevine medicine，was named wilfondilHookF Tripterygium hasbeenshow