AnnexinⅠ在子宫内膜异位症中的作用及机制研究.pdfVIP

·中文摘要· Annexin I在子宫内膜异位症中的作用及机制研究 目 的 且发病率呈上升趋势，虽然是良性病变，但其病理过程表现出浸润、转移等恶性 病的特征。目前有关内异症发生的分子机制尚不清楚。 改变可能是内异症发生的遗传学基础，这些改变直接影响子宫内膜异位症的发病 过程，影响逆流经血中的内膜碎片的粘附、侵袭和异位生长。在前期工作中，通 过比较EMS在位内膜与正常的子宫内膜蛋白质组学的变化情况，我们发现膜联蛋 白家族成员AnnexinI蛋白为差异表达明显的基因，提示其可能与内异症的发生相 关，但其具体作用机制尚不清楚。 Annexin I是一种Ca2+依赖性的膜联蛋白，定位在细胞浆，或是以钙依赖的方 式与细胞膜或者细胞骨架相连，在细胞信号转导、DNA复制、细胞分化、粘附、 凋亡及钙离子通道的形成等诸多生命活动中发挥重要的作用。AnnexinI为受体酪 氨酸激酶的底物，对磷脂酶A2(PLA2)具有抑制作用，进而对前列腺素的代谢具 有负调控的作用。研究发现AnnexinI可以和多种蛋白质发生相互作用，如S100 factor growth 家族成员、F．肌动蛋白、胞浆磷脂酶A2、表皮生长因子受体(epithelial I存在多个潜在的磷酸化位点，可 receptor,EGFR)以及0【481整合素等。Annexin 以作为EGFR酪氨酸激酶的磷酸化底物，特异性的调节有丝分裂激活的蛋白激酶 (Mitogen-activatedproteinkinases，MAPK)信号转导通路，参与细胞的生命活动。 在恶性肿瘤疾病中发现AnnexinI的表达水平出现多样化的情况，并且发现其 与肿瘤细胞的分化程度有关。在妇科疾病中发现AnnexinI在子宫内膜非典型增生 中高表达，在子宫内膜腺癌组织中表达减低。研究表明子宫内膜异位症具有侵袭 和转移等某些恶性疾病的病理特征，其病理改变以及临床表现上都与肿瘤疾病有 着相似之处。这些研究结果提示我们可以从研究肿瘤细胞的生物学角度去观察子 宫内膜异位症在位内膜细胞功能的变化情况，并以此为研究方向来探讨其分子病 理的情况。 本研究拟首先观察AnnexinI在临床EMS病人中的表达情况，同时参照文献报 道的方法在体外分离和培养人子宫内膜腺上皮细胞，在这些工作的基础上采用体 外实验进一步探讨AnnexinI在子宫内膜异位症中的具体作用机制。 方法 一、临床资料的收集及观察AnnexinI的表达情况 1选择2005年6月至2006年6月，因子宫内膜异位症在中国医科大学盛京医院 妇产科经开腹手术或腹腔镜手术行子宫切除术的病例组织，选择同期因宫颈病变 CINIII行子宫切除的患者的子宫内膜组织为对照(对照组) 2免疫组织化学方法检测AnnexinI在子宫内膜异位症组织中的表达情况 3免疫荧光化学方法检NAnnexinI在子宫内膜异位症组织中的表达情况。 4实时定量PCR(Real．timePCR)方法检NAnnexinI在子宫内膜异位症组织 中的表达情况。 5westem blot方法检NAnnexinI在子宫内膜异位症组织中的表达情况。 二、体外分离及培养人子宫内膜细胞 1收集标本 2用胶原酶消化，筛网滤过的方法分离培养人子宫内膜腺上皮细胞和基质细 胞。 3倒置光学显微镜下观察细胞的形态、贴壁状态。 4利用免疫细胞化学方法鉴定培养细胞的纯度。 5利用免疫荧光技术鉴定培养细胞的纯度。 6利用免疫细胞化学方法检NAnnexinI的表达情况。 7三重免疫荧光的方法检$1JAnnexinI在子宫内膜腺上皮细胞中的分布情况。 三、Annexin I在子宫内膜异位症中的作用机制 2 1收集临床新鲜子宫内膜标本。 2用含有EGF的培养液培养正常人子宫内膜腺上皮