5HETE引起人白血病K562细胞凋亡及其信号转导机制的研究.pdfVIP

博士栳立 5--HETE引鑫上白蠹‘1562佃胞凋亡鱼舆挂粤转辱机钠研宓 英文缩写 K562 human K562cell erythroleukemia AA arachidonicacid 5．L0 5-lipoxygenase COX cyelooxygenase 5(s)一HETE 5(s)-hydrooxyeicosa-6E，8Z，1IZ，14Z -tetraenohieacid ERK extracellular kinase signal—regulated M匣K M慵PK／ERKkinase Np圆K kinase mitogen-activatedprotein RT．PCR reverse chainreaction polymerase transcriptase SB203580 PD098059 genestein 7-Trihydroxyisoflavone ●本研究受国家杰出青年基金(No资助 博士话土 5-HETE引船工白丘意K562细胞锄亡直舆性鼍抖粤机纠伪砷鑫 摘 要 5-HETE是花生四烯酸(AA)代谢过程中5一脂氧合酶(5-L0)通路的产物。 近年来随着国际上对花生四烯酸与肿瘤发生发展关系的研究增多，发现花生四 烯酸的5一L0通路与不同的肿瘤凋亡有关联。研究发现在多种肿瘤细胞中5-LO 抑制剂能增加凋亡、引起G1期阻断；在包括前列腺癌、肺癌和胰腺癌的多 种肿瘤细胞中，5一脂氧合酶通路的代谢产物5-HETE作为一种生长促进剂，引 起肿瘤细胞增殖、能对抗5-LO抑制剂导致的凋亡。在人的前列腺癌细胞中 5-HETE引起增殖，可能作为一种有效的存活因子。 但5．LO通路在不同肿瘤细胞中生物学作用研究的结果并不一致。对人 的自血病K562细胞中5．LO通路的研究得到与以前研究相反的结论，即： 5-HETE能诱导K562细胞凋亡。到目前为止对5．LO研究中并未发现同工酶， 因此可以认为，在不同类型细胞中5-LO的作用是相似的，其在不同类型细胞 中的代谢产物也应该是相同的。对于这种在不同肿瘤细胞中出现截然不同的反 应，我们分析是代谢产物在不同肿瘤细胞中的信号转导途径的不同而导致的。 因此我们进行了以下实验研究在自血病K562细胞中细胞信号转导和凋亡调控 基因等方面的分子生物学机制。 研究主要从细胞形态学、流式细胞半定量及5-HETE对K562细胞损伤中细 胞内促凋亡和抗凋亡基因改变等方面，考察了5-HETE对K562细胞引起的凋亡作 磷酸化及P38 MAPK磷酸化等的变化：并应用酪氨酸蛋白激酶抑制剂genestein、 P38 磷酸化途径及MAPK途径上的作用，试图阐明5-HETE通过MAPK信号转导途径引 起K562细胞凋亡的机制。本研究主要结果如下： 1．5-HETE引起自血病K562细胞的凋亡： 度在0．1～0．5州时发现：在浓度为0．5州、损伤时间为12h时能引起K562 细胞损伤。 1．2电镜观察损伤的形态学改变：与无5-HETE处理组对照，在5-HETE刺激下， 博士话立 5--HETE引盘^白蕾鼻1562细艚