CpG甲基转移酶诱导紧密连接蛋白7和8基因表达下调对人结肠癌HT29细胞增殖和凋亡的影响.pdfVIP

生堡旦生瘗苤盍垫!!生!旦笠箜鲞筮鱼塑g塾也』Q竖!!：』坚些垫!!：!尘：箜：塑!：鱼 ·405· ．基础研究． CpG甲基转移酶诱导紧密连接蛋白7和8 基因表达下调对人结肠癌HT一29细胞增殖 和凋亡的影响 王文辉 汪芳裕魏娟 沈芸竹 刘畅舒小闯 【摘要】 目的 探讨CpG甲基转移酶M．SssI对人结肠癌HT-29细胞中紧密连接蛋白7 (claudin-7)和chudin-8表达的调节作用，及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法以50U／lIll的 M．SssI处理HT-29细胞24h(过甲基化组)，采用重亚硫酸盐测序法检测claudin-7和claudin-8基因 mRNA的表达，细 启动子区域CpG岛的甲基化状态，实时荧光定量PCR法检测claudin-7和claudin-8 胞免疫荧光技术和Westernblot法检测claudin-7和claudin-8蛋白的表达，Hoeehst33342荧光染色法 和流式细胞术检测HTj29细胞的凋亡，四甲基偶氮唑蓝(MTr)法检测HT-29细胞的增殖。同时设对 照组(以2山PBS处理HT-29细胞)和5-Azacytidine组(以10 pjnol／L5-Azacytidine处理HT-29细 胞)。结果过甲基化组clandin-7和claudin-8靶序列中发生甲基化的CpG胞嘧啶数目分别为25和 mRNA和蛋白的表达均明显高于对照组(均P0．05)。Hoechst33342荧光染色结果显示，对照组和 5-Azacytidine组的HT-29细胞均呈均匀蓝色荧光，细胞呈圆形，大小一致，无明显差异；而过甲基化组 HT-29细胞呈高度白色荧光的凋亡细胞明显增多。流式细胞术检测结果显示，过甲基化组HT-29细 胞的早期凋亡率比对照组增加84．7％(P=0．002)。MIT法检测结果显示，过甲基化组HT-29细胞的 生长速度较对照组缓慢(P=0．002)，HT-，挣细胞的增殖抑制率为32．1％；5一Azacytidine组HT_29细胞 的增殖水平与对照组相似(P=0．084)。结论CpG甲基转移酶可以通过上调chudin-7和clandin-8 基因启动子区的甲基化程度，下调HT-29细胞中claudin-7和elaudin-8mRNA和蛋白的表达，从而诱 导细胞产生凋亡，并抑制其增殖。 【主题词】结直肠肿瘤； 甲基化；HT-29细胞；紧密连接蛋白；细胞凋亡；细胞增殖 induced of anditseffectsOil and CpGmethyltransferasedown-regulationclaudin-7，-8 proliferation ofhumancolorectalCallcerHT-29cellsWANG apoptosis Wen—hui‘，WANGFang-yu，WEIJuan， SHEN and ofGastroenterology of Yun-zhu，LIUChang，SHUXiao—chuang．’DepartmentHepatology，School General ofNanjingMilitaryCommand，PLA，Nanjing Medicine，NanjingUniversity／NanjingHospital 210002，China author：WANGFang-yu，Email：wangfangyu65@yahoo．corn．cn，． Corresponding To the effectof 【Abstract】Objectiveexploreregulatory CpGmethyltransferase