血p53蛋白对肺癌诊断价值的研究.DOCVIP

临床医学论文-血p53蛋白对肺癌诊断价值的研究 ???????????? 作者：沈巨信 秦娥 周国忠 韩东方 贺群 孙健 【关键词】? 蛋白对肺癌 ??? 肺癌发病率逐年增高，早期诊断对提高患者生存率至关重要。p53蛋白是肺癌相关基因p53基因编码的核酸蛋白，在癌变的早期阶段，即可在血液中出现［１］。本研究采用新技术－流式细胞术（Flow Cytometry，FCM），分析FCM定量检测肺癌患者血细胞中p53蛋白水平，探讨p53蛋白在肺癌诊断中的应用价值。 　　1? 临床资料 　　1.1? 一般资料? 　　肺癌组为2006年5月至2007年8月本院确诊患者，共30例，男21例，女9例，平均年龄(60.8±10.44)岁，所有入选的患者均经纤维支气管镜（简称纤支镜）肺活检、经皮肺穿刺活检、手术等组织病理学确诊，排除接受过放、化疗或肺癌手术，有严重心肺功能障碍不能耐受纤支镜检查者。其中鳞癌16例，腺癌8例，小细胞癌6例；按国际抗癌联盟（UICC1997）分期标准进行临床TNM分期，I期6例、Ⅱ期10例、Ⅲ期9例、Ⅳ期5例。同期收集肺部良性疾病组30例为对照组，包括肺结核5例、支气管扩张6例、肺炎15例，慢性支管气炎4例，平均年龄(58.0±11.66)岁，经细菌学、影像学、病理学确诊。 　　1.2? 标本采集? 所有受检对象均抽肘静脉血5ml，放置-20℃冰箱内保存待检。 　　1.3? 实验步骤??? 　　外周血细胞内p53蛋白检测? 采用双色标记法，取外周血2μl EDTAK2抗凝，CD45-PCY 10μl+100μl全血，避光反应15min。PSB离心沉淀物制成悬液，用试剂intrapreptm(Immunotech公司)单细胞固定和破膜。加破膜剂Ⅰ液150μl，振荡后放15min，加FPBS离心洗涤，取沉淀物，加破膜剂Ⅱ液150μl，轻轻混匀放置5min，加20μl p53流式细胞仪检测，轻轻摇匀1～2s，放置20min，加PSB 1ml离心洗涤，上机，仪器方案“2006p53”，计数1万个细胞中p53表达百分率作为观察数据。 　　1.4? 主要试剂及仪器? 　　p53蛋白抗体试剂盒购自Cell Signal Technology公司。流式细胞仪由美国公司提供，型号为Coulter EPICS－XL。 　　1.5? 统计学处理? 　　计量资料用(x±s）表示，均数间比较采用t检验，以Excel 2000建立数据库，应用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC）分析法综合评价诊断实验的实用价值。所有统计计算及绘图采用SPSS 11.0系统软件完成。 　　2? 结果 　　2.1? 两组患者血p53蛋白检测水平比较? 　　肺癌组(2.16±1.88)、对照组(0.93±0.51)，2组比较，差异有显著性(P0.01)。 　　2.2? 肺癌患者血p53蛋白水平与病理类型的关系? 　　p53水平小细胞肺癌6例，为(4.76±2.92)、非小细胞肺癌24例，为(1.46±0.52)，2组比较，差异有显著性P＜0.05。 　　2.3? p53蛋白对肺癌诊断的敏感性和特异性分析? 　　以肺部良性疾病为对照组，以1－特异性作横坐标，敏感性作纵坐标，作ROC曲线（见图1），选择诊断分界点及敏感性和特异性。用p53试剂进行检测，取诊断点为1.265，其诊断敏感性为70％，特异性为83.3％，准确率76.7％， Youden指数（Yi）为0.533。进一步计算ROC曲线下面积(Az)（见表1），显示单个试剂p53的曲线下面积为0.793。表1? 单个试剂p53的ROC曲线下面积、标准误、P值和95％可信区间（略） 　　3? 讨论 ??? p53基因定位于17号染色体短臂，全长20kb，共有11个外显子和10个内含子，其外显子5～8是突变热点区域，主要生物学功能为细胞周期阻滞、DNA修复、诱导细胞调亡等［２，３］。抑癌基因p53突变是人类癌症中最频发的基因事件之一，与肺癌之间存在相关关系，有报道在SCLC患者中有90%～100%发生p53基因突变，在NSCLC的各种类型如腺癌、鳞癌等患者中p53基因突变率也达50%～60%，对肺癌的早期诊断有重要意义［４］。董光同等［5］报道小细胞肺癌p53基因突变为98%，鳞癌为75%，腺癌40%，且与分期关系为Ⅰ期26%，Ⅱ期58%，Ⅲ期71．4%［５］。p53基因突变直接导致突变型p53蛋白高表达，p53蛋白作为一个细胞周期调控因子，在细胞增殖与凋亡的平衡上起着重要的作用，它的异常早于肿瘤的发生［６］。周欣等［７］报道用免疫组化方法检测肺癌患者痰p53蛋白表达,结果发现p53蛋白是肺癌发生的早期事件,在组织发生恶变后无显著关系。故检测血p53