滨蒿内酯对豚鼠哮喘模型的平喘作用及其机制的研究.pdfVIP

中 文 摘 要 前 言 滨篙内醋(Scoparone,Sco)又名篙属香豆精，是传统中药茵陈 中利胆的主要有效成份之一，其药理作用除利胆保肝外，尚有消炎 镇痛、降血脂、免疫抑制、降压等。有报道Sco的作用机制与钙拮 抗作用有关。 支气管哮喘是一种气道的慢性炎症性疾病。近来认为，细胞 内钙浓度([Ca]i)的增高是气管平滑肌收缩和对致敏介质敏感 性增高的主要原因。Sc。兼具消炎和钙拮抗作用，本科研组在研 究中发现其能明显舒张离体豚鼠气管平滑肌，故推测其可用于治 疗哮喘。目前国内外文献中尚未见到有关该药平喘作用的报道。 为此，我们观察了Sco对豚鼠哮喘模型的平喘作用，并进行了豚鼠 气管平滑肌细胞分离.以观察Sc。对气管平滑肌 C〔扩]‘i的影响。 材料与方法 一、豚鼠哮喘模型的制备及Sco平喘作用 哮喘模型制备及动物筛选:取健康豚鼠置4L玻璃钟罩内，以 0.2%磷酸组织胺(His)和2%氯化乙酞胆碱(Ach)等量混合液作 为引喘液，用超声雾化器向钟罩内定量喷雾15s。取出后立即观 察引喘潜伏期，超过120s者淘汰，以此法筛选合格豚鼠。 将合格豚鼠随机分为空白对照、阳性药物对照及Sco治疗组。 采用两种途径给药，一种是先用超声雾化器定量雾化给药1min, 清除药液1min后立即依上法引喘;另一种是经腹腔注射给药 30min后，立即依上法引喘。观察并记录引喘潜伏期与发生抽搐 ·1 · 的动物数，超过120s者以120s记录。 二、豚鼠气管平滑肌细胞分离及Sc。对 c【a2+]i的作用 击头处死豚鼠后，取出全部气管、主气管及肺，在通人95%仇 和5%co,混合气的冰浴无Ca2+和u1扩十的Hanks液中，剪除其外 周结缔组织、脂肪组织及软骨，分离气管、主支气管及二、三级支气 管，用棉签轻轻刮除粘膜及粘膜下层，将气管平滑肌剪成2x5mm 左右的组织块，置人20mlHanks液中，在32℃恒温、通人95%仇 和5%CO:混合气的条件下，平衡稳定30min。置人含有0.1% Collagenase和0.01%soybeantrypsininhibition的酶液中消化30 min，更换新鲜酶液10ml继续消化60min，用4`CHanks液30ml 分3次冲洗，并用含10%小牛血清的DMEM终止消化10min后， 在5m1DMEM液中适度吹打，过滤，离心1000rpmx3min，用台盼 兰染色后计数，如细胞数目达1x106个 ·ml-’以上，且活细胞率 95%，则加人终浓度为1WM的Fura一3一AM，在32℃恒温、通人 95%0:和5%CO,混合气的条件下孵育30min，冲洗、离心 1000rpmx3min后，即可进行测定气管平滑肌C【a2+]io 实 验 结 果 一、Sco对豚鼠哮喘模型的平喘作用 提前雾化吸人Sc。能有效地拮抗Ach和His等容混合液对豚 鼠的引喘作用，使引喘潜伏期明显延长，抽搐动物数明显减少，并 且其抑制作用呈明显的剂量依赖性。腹腔注射340mg·L-· 翰一，的Sc。对Ach和His所致豚鼠哮喘模型则无明显的抑制作 用。 二、Sc。对分离的豚鼠气管平滑肌C【as.]i的影响 Sco可明显降低气管平滑肌 【Ca]i，提前加人Sco能抑制 His和Caffeine对气管平滑肌 C〔at]i的升高作用。 ·2 · 讨 论 提前给豚鼠雾化吸人Sco出现明显的平喘效果，显示出Sco 确切的平喘疗效，同时也证明预防性给药有效。参照小鼠口服 Sc。的LD，值1195.5mg.kg一(‘待发表)可知，本实验中给药浓度 低，且为局部用药，故在有效剂量下基本无毒副作用。但是，腹腔 注射小剂量Sc。时对Ach和His所致豚鼠哮喘模型则无抑制作 用。 实验结果表明，Sco可直接降低豚鼠气管平滑肌 C〔a2.]i，并 且能抑制His和Caffeine对气管平滑肌 C【at.]i的升高作用，因 此，S