RNA干涉抑制子宫颈癌HPV16 E6基因的研究.pdfVIP

RNA干涉抑制子宫颈癌HPV16E6基因的研究 研究生 牛晓宇 导 师 彭芝兰 中 文 摘 要 目的 采用RNA干涉技术干扰宫颈癌CaSki细胞中HPV16E6基因 转录，通过体外实验和雌荷瘤裸鼠体内实验以了解其能否特异性沉寂 HPV16E6基因及其时效性，以及对体内肿瘤的抑制效果。方法 设计 合成针对 HPV16E6的siRNA，借脂质体转染宫颈癌 CaSki细胞，测定 转染后不同时间点的细胞凋亡率，RT-PCR测定HPV16E6mRNA变化， Westernblot和流式细胞仪检测转染前后HPV16E6蛋白表达情况。建 立子宫颈癌动物模型，将siRNA注入裸鼠腹腔或瘤内直接给药，测定肿 瘤体积的变化，HPV16E6组织切片免疫组化和肿瘤细胞凋亡 TUNEL检 测。结果 HPV16E6siRNA转染细胞后 24h,48h,5d和 9d时凋亡 率分别为:7.7%,11.8%,37.4%和 12.60koRT-PCR显示转染后 24h, 48h,5d和9dHPV16E6mRNA量减少了77%,83%,59%和41%，阴性对 照组HPV16E6mRNA量和作为内对照的0-