玉米HDZip转录因子家族抗旱相关基因鉴定及ZnYihdzlo功能分析.pdf

摘 要 玉米是世界上重要的粮食作物之一，干旱、盐渍、低温等非生物胁迫对玉米 的生长造成了严重的影响，也是限制其产量的主要胁迫因素，抗逆育种一直是重 要的育种目标。挖掘抗逆相关功能基因并利用这些基因培育抗逆新品种是应对逆 境胁迫，提高玉米产量的最为有效途径。研究表明，转录因子在提高作物对胁迫 的耐受性过程中起到了重要作用。过量表达特定的胁迫应答转录因子可以调控多 个下游抗逆功能基因的同时表达，从而使作物获得良好的综合改良效果。目前， 这种方法已经成为植物抗逆遗传改良育种中的研究热点。同源异型-亮氨酸拉链 (HD-Zip)蛋白是高等植物特异的一类转录因子，参与了植物的胁迫应答和生长 发育调控。因此，挖掘胁迫应答HD-Zip 基因对开展玉米抗逆改良育种具有重要 的意义。本研究运用生物信息学的方法对玉米全基因组 HD-Zip 基因进行鉴定， 分析这些基因的结构特点、进化关系以及干旱诱导表达模式，并通过过量表达技 术对玉米 Zmhdz10 基因在植物非生物胁迫应答过程中的功能及作用机制进行了 研究，获得了如下主要结果： 1. 通过 Blast 同源搜索，共鉴定了 55 个非重复的玉米 HD-Zip 基因家族成员 并从基因结构和进化等方面进行了分析。研究发现，玉米HD-Zip 家族的大部分 基因序列高度保守，与拟南芥和水稻 HD-Zip 基因在结构上不存在明显差异。根 据进化关系，55 个玉米 HD-Zip 基因被进一步分为 4 个亚族 (I-IV)。染色体定位 分析显示，55 个基因在 10 条染色体上的分布是非随机的。对玉米 HD-Zip 基因 复制事件进行分析，发现参与片段复制的基因占玉米 HD-Zip 基因总数的 62%， 表明片段复制对玉米 HD-Zip 基因数量的扩张起到了重要作用。 2. 对 17 个 HD-Zip I 基因上游 2 kb 启动子序列的抗逆相关顺式作用元件 (ABRE ，LTRE 和 DRE)进行了分析，发现除 Zmhdz16 外，其余 16 个基因的启 动子区域均含有 1 到多个抗逆相关顺式作用元件。对复制基因启动子区域内的3 种顺式作用元件的分布进行比较，发现三种顺式作用元件在复制基因启动子区域 内的数量和位置有较大的差异。利用荧光定量 PCR 方法对 HD-Zip I 基因的干旱 诱导表达模式进行了分析，发现有 12 个基因的表达显著上调，其它 5 个基因表 达下调。对复制基因的干旱诱导表达模式进行比较，发现复制基因的表达模式总 体较为相似，说明这些基因可能存在着基因功能的冗余现象。 3. 根据进化关系和干旱诱导表达模式，筛选了一个受干旱强烈诱导表达的 候选基因 Zmhdz10 并从玉米自交系 B73 中克隆了该基因。序列分析显示， Zmhdz10 基因 cDNA 全长为 825 bp，编码 274 个氨基酸，与玉米 B73 数据库中 公布的序列完全一致。进一步的表达分析发现 Zmhdz10 的表达还受到盐和外源 I ABA 的诱导。组织表达模式分析显示，Zmhdz10 在根、茎、叶、果穗、雄花序、 幼芽和花丝 7 个组织中均有表达，其中在叶中的表达量最高。通过基因枪轰击洋 葱表皮细胞的瞬时表达分析显示，Zmhdz10-GFP 融合表达蛋白定位在细胞核中。 酵母杂交实验表明， Zmhdz10 在酵母细胞中能够激活报告基因的表达，能够对反 向重复序列CAAT(A/T)ATTG 发生特异性的结合。 4. 过量表达 Zmhdz10 的转基因植株在生长表型上与对照植株没有明显差 异。在干旱和盐胁迫处理后，Zmhdz10 转基因水稻表现出对胁迫较强的耐受性。 通过对相对电解质渗透率、丙二醛含量和脯氨酸含量等生理生化指标进行测定， 发现转基因植株在胁迫条件下的相对电解质渗透率和丙二醛含量低于野生型植 株，脯氨酸含量高于野生型植株。另外，ABA 敏感性实验显示 Zmhdz10 过量表 达转基因植株显著提高了对外源 ABA 的敏感性。 5. Zmhdz10 过量表达的转基因拟南芥植株同样表现出对干旱和盐胁迫较强 的适应性和忍耐力。通过对P5CS1 、RD22 、RD29B 和ABI1 4 个胁迫/ABA 应答 功能基因的表达分析