人乳头瘤病毒（HPV）在中国食管癌中检测以及HPV16 E7作用机制研究.pdf

中国协和医科大学博士论文 人乳头瘤病毒(HPV)在中国食管癌中的检测以及 HPVl6E7作用机制的研究 中 文 摘 要 恶性肿瘤是严羹危害人类健康的疾病之一，虽然经过各图科学家多年的努力，取得 了诲多霹喜的残续，镁诲多脖瘦斡发瘸蘸嚣与发病极镁至今镄然没有臻凌筑答爨。霹以篱 定的是，肿瘤的发生怒一个多因素作用、多基因参与、经过多个阶段才最终形成的极其复 杂懿燮凌学j妻程。悉黪染因素终为耱瘩发生避疆中一个跑较耋爱静因素，越来越多遗受瑙 了人们的关注。人乳头瘤病毒(human 秘感絷函索。它与富琰癌鑫采美系豹确定大大维动了富颈癃琰防与治疗豹避鼹，使得警颈 癌成为最有希趣通过疫苗接种丽得到按制的第一个人类恶性肿瘤。 除宫颈癌之外，HPV感染还可能与头颈部肿瘤及食管瘸等其他肿瘤的发生相关， 如果这些肿瘤与HPV躲关系褥到进一步确涯，将会大大扩大}糖V疫蘸对黠瘩孵毒效预防 范围，而食管癌又是我国的高发肿瘤之一，因此，很肖必要对二者相关性作深入的研究。 梵遴一疹礁定HPV在我蓬食管瘗孛瓣撂震，我粕选取寒霆中蓬两个不麓蓬发嚣(安 阳与山西)的食管癌标本48例以及医科院肿瘤医院的食管癌30例(代袭非高发区的群体) 作为磺究对象。锌对HPVl6 E6基函及荚产彩律检溅，奔lPCR，原位杂交，免痰组纯三种 鳞癌缀织与23例癌旁“正常”食管上皮组织。结果显示：首先，HPV感染率凝有明显的 地域慢差异。HPV感染率依次为安阳最高，其次为山鼹，瑟jb京的最低。jE寒收诊痰人 来自垒国各地，总体上代表了来自非高发区的瘸人群体，免疫缎化方法检测仅肖一例病毒 癌蛋基E6期。隧。其次，从三秽方法静分掇来豢，来叁安辍与出嚣载食繁疼孛凌65％PCR 阳性；而且，农PCR检测了HPV DNA基础之上，病毒DNA阳性的病例中大约三分之二 渡漂霞杂交迁实蔻痰毒戆mRNA遣为鬻毪。蔻瘸毒酶嚣6蛋叁懿鬻往率经免疫缀纯证实并 第三，在检测滚旁所谓“歪常”上皮缬胞时，魄可捡出Hpv瘸毒，说明病理上诊断为形 态正常的上皮很有可能已经发生了微观的病交。 然后，我们对HPVl6黧要的癌爱自之～，E7的作用机制进行探讨，主要从引起 1 基因组不稳定性与影响细胞凋亡两方面。 基因组不稳定性(genomic 的数目与结构异常，而中心体数目改变常常是造成染色体异常分离的重要原因之一。最近 事件，不应仅仅看作是肿瘤恶性进展的一个结果，而是驱动肿瘤发生的原动力(driver)。 这一点在结肠癌中已经通过数学模型得到了证明。但是，有关染色体非整倍性的产生机制 E6和E7癌蛋白对中心体复制以及基因组不稳定性的影响机制，是研究肿瘤中中心体异常 以及非稳定性产生机制的一个很好的模型。 表达都可以增加中心体数目，说明HPVl6E7影响中心体数目是它的重要基本功能之一。 而后，在HPVl6E7过表达的U20S细胞中，通过RT-PCR与Westernblot检测我们发现， 中心体；STKl5，EBl基因定位于20q。 在结肠癌细胞HCT 基因组不稳定性的可能性，而HPVl6 与对照细胞中染色体拷贝数，发现作为核非整倍性的前驱变化“四倍体”在 胞中出现了更多的非二倍体细胞，提示细胞基因组不稳定程度增加。 定位于20q的STKl5，EBl基因，其表达可以被HPVl6E7所上调。用FISH方法在 癌标本中有STKl5 mRNA水平的高表达。提示STKl5可能参与食管癌的发生。 EBl作为与微管结合的蛋白，对于它在肿瘤中的作用和功能研究较少。我们克隆了 EBl编码区全长的cDNA，转染HEK 2 中国协和医科大学博士论文 表达EBl的稳定株并研究EBl高表达后对细胞生物学性状与有丝分裂的影响。细胞生长 而且癌基因c·myc在EBl高