魔芋凝集素基因克隆及表达研究.pdfVIP

复旦大掌硕士掌位论文一一魔芋凝集录基因的克隆及表达研究 论文摘要 厂＼ l 利用基因工程培育抗虫、抗病作物是目前生物学的研究热点之一。某些植物凝集 素皂被成功地应用于基因工程育种，以培育抗虫、抗病作物。为了进一步对植物凝集 素基因进行研究，我们以天南星科植物魔芋(Amorphophalluskonjac)为材料，利用 RACE．PCR克隆技术，成功克隆了一条新基因。通过相关的生物信息学分析，发现此 基因的核苷酸序列及其推导出的氨基酸序列与兰科、石蒜科以及天南星科其它植物的 凝集素基因有很高的相似性，为甘露糖特异结合的凝集素基因。丫 为了对目的基因的功能进行研究，我们首先构建了目的基因的原核表达体系。将 编码魔芋凝集素成熟蛋白的基因序列构建到了pET(Novagen)系列的表达载体中， 然后转化大肠杆菌BL21和plys菌株，在IPTG的诱导下表达出了目的蛋白，并对目 的蛋白进行了纯化。 我们进一步构建了目的基因的植物表达体系。将pBll2l中的报告基因(flus)替 pCAMBIA2300的多克隆位点处，构建了一个能同时转化单、双子叶植物的高效表达 菌株EHAl05中。然后采用农杆菌介导的烟草叶盘转化法，将目的基因转入模式植物 烟草中，在诱导生根移栽后对烟草苗进行PCR检测。并对部分PCR阳性苗进行了 凝集素蛋白。Southern杂交结果显示目的基闵已经整合到了烟草的基I天】组中。 关键词：魔芋凝集素℃轴—掣啤妇础*知咖q卿丽丽证碘!；基因克隆；重组蛋 ’ 白；基因转化。 复旦大掌硕士掌位论文一一魔芋凝泰素基因的克隆及表达研究 Abstract Some lectinshavebeen usedinthe to plant successfully geneticengineeringdevelop or hasbeenahot of pest—resistantfungal-resistantcrops，which spotgeneticengineering research．The cDNA or full—lengthofAmorphophalluskonjacagglutininlectin(AKA)，was theuseofRACE—PCR ofAKA from cloned withlectins by technique．Significantsimilarity and atthenucleicacid and ofdraceae,OrchidaceaeAmaryllidaceae plantspecies sequence deducedaminoacid levelwasfound sequence bycomparativeanalysis． ofthe The mature wasconstructed codingsequence konjacaggtutinin Amorphophallus