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THERESEARCHOFREPL!CASEGENE
AND ITSPARTIALSEQUENCES
MEDIATEDRESISTANCETOALFALFAMOSA!CVIRUS
ABSTRACT
ThefulllengthcDNA,the5-endhalfpartcDNAandthe3-endhalfpart
cDNAofthereplicasegenewhichencodes90KDproteininAIMVwere
recombinatedwiththeplantexpressionvectorpROKIIrespectivelyandthe
recombinatedvectors:pAIMV-FL,pAIMV-5T,pAIMV-3Twereobtained.Via
AgrobacteriumtumefaciensLBA4404，thetargetsequenceinthesevectorswere
introducedintoNicotiana benthamianagenomeandtherespectivetransgenic
linesweregained.Infulllengthand5-endhalfpartcDNAtransformed
lines,afterinoculatedwithA1MV40days,therewerenosymptomsandnoviurs
particalswhichcanbedetectedbyELISA.Whereasin3-endhalfpartcDNA
transformedlines，boththesymptomsincludingchlorosisofleavesandtheviurs
particalsappearedinsomestrains.Theresearchindicatedthatdifferentsequences
ofreplicasegenetransformedplantsperformeresistancetoAIMVinfectionin
differentdegrees.
KEYWORDS:Alfalfamosaicvirus，replicasegene，viurs-resistance，transgenic
引 言
首蓓花叶病毒 (Alfalfamosaicvirus，AIMV)是首稽花叶病毒组的典型成员，属
于外壳蛋白((coatprotein,CP)依赖的三组分正链RNA病毒。构成基因组的三条单链RNA
分别为RNAI(1.04x106D),RNA2(0.73X106D),RNA3(0.68x106D)[1l。此外，存在亚基因组
RNA4，它由RNA3衍生形成，位于RNA3的3’末端.RNAI-RNA4的序列已测定[2-51，其
中RNAI,RNA2分别编码126KD,90KD的PI,P:蛋白[6-31，构成AIMV复制酶复合物的两
个亚基18-91,RNA3编码32KD的P3蛋白和24KD的外壳蛋白[6-71。但离体翻译系统表明，
自RN凡并不翻译产生CP蛋白，而是由亚基因组RN扣充当CP蛋白的有效mRNA。作
为CP依赖的RNA病毒，AIMV的RNAI-RNA4具同源的3’末端非编码序列，同源序列
形成保守的二级结构，同时其外壳蛋白结合位点与CP结合，它们共同在病毒的侵染、复
制、组装等过程中起着决定作用[[101.除上述已知结构、功能的RNA,-RNA4，还有人先
后报道在AIMV的425株系中[II],H-10分离物中[121,$株系中[[131存在附加RNA，其核
昔酸序列、功能及与4种主要RNA之间的确切关系未见报道。
AIMV可以侵染51科双子叶植物中的430多种，其中不少是重要的经济作物，包括
马铃薯、烟草、番茄及首稽等，该病毒通过汁液磨擦和多种蚜虫以非持久方式传播，在千
早条件下能使被感染的作物减产1/3左右，从而对生产造成严重的危害[121。尤其是AIMV
侵染首蓓后可进行种子传染，导致AIMV对首箱的危害有逐年加重及蔓延的趋势。故培育
抗AIMV的农作物新品种是农业生产中有待解决的问题之一。但病毒与其宿主的特殊相互
作用决定了AIMV对农作物的危害无法用常规的技术加以防治。
1986年，Abel等[[141用烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)
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