原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
--优秀硕士毕业论文，完美PDF格式，可在线免费浏览全文和下载,支持复制编辑,可为大学生本专业本院系本科专科大专和研究生学士硕士相关类学生提供毕业论文范文范例指导,也可为要代写发表职称论文的提供参考！！！
■■■■■●一．
。0，
摘 要
本文以烟曲霉(AspergiJJusfumigatus)分泌的壳聚糖内切酶为研究对象，
将其成熟基因成功克隆后，经电转化导入毕赤酵母中实现高效表达。
壳聚糖内切酶是专一性降解壳聚糖生成水溶性壳聚糖与壳寡糖的最理想的
生物催化剂，是替代当前普遍采用强酸等化学降解工艺的急需工业酶。
为了实现其高效表达，本文对几个关键问题进行研究，特别注重重组毕赤
酵母发酵条件的优化，获得的研究资料为壳聚糖内切酶的生产提供了依据。
第一，研究了壳聚糖内切酶基因电转化到毕赤酵母中的最佳方式。确定了
15。
重组毕赤酵母表达载体pPIC9K—Csn经SalI线性化后电转化入表达宿主GSl
第二，研究了多重组子的筛选。采用不同浓度的抗生素G418筛选多重组子，
发现在4mg／mL的G418中筛选多重组子效果较好。经PCR分析后表明，壳聚糖
内切酶基因在GSll5中得到了正确的高效表达。经酶活检测，实验室摇瓶发酵
时，多重组子在毕赤酵母中表达的酶活最高可达67．93U／mL。经SDS—PAGE测定，
表达产物的分子量为25KD。
第三，对重组毕赤酵母发酵条件进行了优化。经过两个发酵阶段的条件优
Biotin
Biotin
条件下诱导培养48h，接种比率为1：l。验证实验表明，建立高密发酵生产条
件，可获得更为理想的表达效果。在最佳发酵条件下，壳聚糖内切酶产量平均
可达107．07U／mL。
以上研究结果表明，本研究构建的基因工程菌在毕赤酵母中成功表达，并
筛选出多重组子。实验室摇瓶发酵时，酶活可达67．93U／IIlL。在高密发酵生产条
I
件下，可获得更为理想的表达效果。因此该工程菌所产的壳聚糖内切酶
的工业化生产和应用前景。
关键词：壳聚糖内切酶毕赤酵母酶活性高效表达
II
’I Abstract
夕
to
Inthisresearch order chitosanase
high
paper，in expression,thegeneencoding
o
from hadbeen clonedintoPichia host
fumigatus successfully pastoris
Aspergillus
GS115byelectroporation．
Endo-chitosanaseisa ofwater-solubechitosanand
enzymedegradation
specific
ofthebest isalternativetothe
chitooligosaccharideproduction biocatalyst，which
commonuseof acideandotherchemical in
current strong degradationprocesses
needofindustrial
urgent enzymes．
Ino
文档评论（0）