抗结核药物异烟肼INH引起家蚕氧化损伤机制研究.pdf

抗结核药物异烟肼（INH ）引起家蚕氧化损伤的机制研究 中文摘要 中文摘要 家蚕（Bombyx mori ）是一种重要的经济昆虫，也是鳞翅目的模式昆虫。家蚕 在基础物质代谢和遗传方式方面与人类有很大的相似性，而且分化程度较果蝇高， 体积比果蝇大，为生命科学的一些基础及应用学科提供一个复杂性适度和可操作 性强的研究模型。用家蚕作为模式动物来筛选和评价药物有诸多优势：家蚕与哺 乳动物有相同的药物代谢酶系；家蚕的肠管对药物等的吸收效率与哺乳动物相似； 家蚕对病原体的敏感性与哺乳动物接近，药物的疗效一致；家蚕个体大小适中， 可以手持家蚕进行血淋巴和肠管注射；家蚕的饲养成本低，世代周期短，没有动 物伦理问题的困扰，符合 3R 替代的实验理念；家蚕活动迟缓，不会产生生物危害。 家蚕作为模式动物，目前已经在人类生理、疾病、遗传和开发新型药物的研究方 面发挥作用。利用家蚕建立起来的天然免疫活性化模式、细菌感染模式和肝病模 式等在医学研究方面具有重要的意义。 异烟肼（INH ）作为当前不可替代的一线抗结核临床药物，其药物损害作用一 直困扰着当前医学界。一直以来，人们使用哺乳动物作为研究 INH 的肝损伤模型， 但是尚有诸多问题急需解决。 为了探究建立家蚕作为药物筛选和毒性评价模型的可行性，本文采用家蚕作 为实验动物探讨了 INH 作用后急性毒性的评价、谷胱甘肽代谢及 GST 活性变化、 转氨酶活性变化及脂肪体差异基因表达情况等。主要获得了以下结果： 1. 用家蚕品种大造 5 龄第 3 天幼虫经口灌喂若干剂量梯度的异烟肼。结果表 明：家蚕幼虫对 INH 的急性毒性反应明显，呈现多种中毒症状；且雌性家蚕幼虫 对 INH 的毒性耐受能力比雄性家蚕较差，即毒性敏感度较高；雌雄家蚕对异烟肼 的半数致死剂量(LD50)有差异，家蚕雌雄个体对外源药物的抗药性都有较大差异。 2 ．以剂量为2 000 mg/kg 的抗结核模式药物异烟肼处理家蚕 5 龄第 3 天幼虫， 检测家蚕中肠、血淋巴和脂肪体的抗氧化解毒相关代谢的变化。结果表明：家蚕 取食异烟肼后，雌雄家蚕各组织中谷胱甘肽代谢及还原型与氧化型谷胱甘肽比值 有规律性变化，谷胱甘肽 S-转移酶(GST)活性的变化反映家蚕解毒能力的差异。 GST 活性雄蚕高于雌蚕，脂肪体高于中肠。家蚕取食异烟肼后，引起了各组织谷 胱甘肽氧化还原状态的改变和酶活性的变化，脂肪体起主要解毒代谢作用。 I 中文摘要 抗结核药物异烟肼（INH ）引起家蚕氧化损伤的机制研究 3. 比较了经口灌喂异烟肼后家蚕血淋巴组织 GPT 及 GOP 活性的变化影响。 结果表明：不同剂量的 INH 可以使家蚕脂肪体产生不同程度的毒害作用，脂肪体 等组织细胞的损伤可以导致 GPT 和 GOT 释放至血淋巴中，从而检测出较高的 GPT 和 GOT 酶活性，雄性家蚕酶活的变化幅度比雌性家蚕低。通过对家蚕血淋巴组织 的GPT 和 GOT 活力的测定可以估计脂肪体等组织 INH 中毒的损伤程度。 4. 用数字基因表达谱（RNA-Seq）技术分别构建了家蚕雌性 5 龄 3 天幼虫取 食 INH 前、后文库，对构建的家蚕对照组和试验组 2 个文库进行了 Clean reads 表 达及分布分析、基因注释、基因表达量的确定、基因表达差异以及基因本体功能 显著性富集分析等。结果表明：INH 处理家蚕前后，脂肪体组织中有 75 个显著差 异表达基因，44 个差异基因上调，31 个差异基因下调；GO 功能聚类分析这些基 因归于代谢和信号传导相关的生物学功能并参与类似的生理过程；KEGG Pathy 分 析表明异烟肼抗药性涉及到代谢、生物合成和信号传递、谷胱甘肽代谢和 GPT 和 GOT 基因调节路径等。这有助于对家蚕解毒相关基因以及探究基因网络调控机制。 通过对 INH 药物作用家蚕幼虫的相关生理生化及数字基因表达谱的初步调 查，为进一步研究家蚕对 INH 的分子解毒机制提供了参考。 关键词：家蚕，异烟肼，氧化还原损伤，转氨酶，LD50 ，差异表达基因，解毒