牛胚胎移植技术产业化及相关生物技术研究.pdf

摘要 牛胚胎移植主要包括供受体同期发情、供体超数排卵、胚胎冷冻解冻和移植等。本文 对对该技术关键环节进行了研究，并对一些相关的胚胎生物技术如活体采卵；胚胎体外生 产、性别鉴定后的体外生产胚胎和卵母细胞冷冻技术进行了探讨．结果如下： 同期发情：育成牛的同期发情率高于带犊经产牛。(带犊3个月以上的经产牛的同期发 情率(放牧型草原红牛、奶牛场荷斯坦牛、舍饲肉牛：42．8％、80．7％、87．1％)明显高于带犊3个月 1％) 以下的经产牛的同期发情率(放牧型草原红牛、奶牛场荷斯坦牛、舍饲内牛：10．4％、55．o％、57 体牛同期发情时间比两次PGF2。早12小时，而且同期化发情程度高于两次PGF2。。同期发 情方法对供体牛的超排效果和受体牛胚胎移植妊娠率没有影响。相反．CIDR+PGF2。还可提 高牛胚胎移植妊娠率。广，一一 超数排卵： 低剂量FSH也能获得较好的超排效果。用国产高纯度的FSH超排，海福特牛平均获可用胚 (P0．01)。超排前物理性穿刺优势卵泡后对安格斯牛超排有一定好处，但与对照组差异不 明显。 胎数均明显的高于自然发情后超排母牛，但可用胚胎差异不显著口O．05)。超短期重复超 排处理(间隔26天)对安格斯和海福特牛的超排效果没有影响。，“’’ 胚胎移植： 用1．5M乙二醇，10％甘油和EFS40冷冻牛胚胎对移植后妊娠率没有差 异．f牛桑葚胚、早期囊胚和囊胚；鲜或冻半胚；供受体发情相差±12小时：10％甘油三 步解冻与1．5M乙二醇一步细管冷冻解冻对胚胎移植妊娠率都没有显著差别伊o．05)。典型 ＼ 响oJ” 活体采卵(OPU)： vs 不同个体采集卵母细胞数量差异明显(18．55．7)(PO．01)。f同 一头奶牛从第一次到第四次采集之间无显著差异，但从第五次以后，每次之间差异显著。 A级OPU胚胎性别鉴定后鲜胚移植妊娠率为80％(4／5)．而B级胚胎鲜胚移植妊娠率为0 ％(o，7)．体外培养6天和7天所获得的囊胚或扩张囊胚的移植妊娠率差异不显著(P0．05)。 而第8天，所获得的囊胚或扩张囊胚的移植妊娠率明显下降。 相同培养时间获得的扩张 囊胚明显高于早期囊胚、囊胚的移植妊娠率。用本实验的BECM系统生产的第7天的胚胎 雌、雄比率为37A对62．6。 高于1．5M EG(77．3呦和I．SM EG+0．IMS(80％)，1．8M 性别鉴定后的胚胎用常规冷冻方法冷冻胚胎不佳。而OPS法玻璃化冷冻解冻后24小时体外 培养存活率90％以上。 卵母细胞冷冻： ED30和ED40玻璃化液冷冻卵母细胞，两者之间解冻后形态正常率、 体外受精卵裂率没有显著性差异(PO．05)，EDS40冷冻后经体外受精获得的桑囊率明显高 于其他组。卜1 i‘ 关键词： 胚胎移植，胚胎生产； OPU；胚胎冷冻；胚胎性别鉴定；牛 II ABSTRACT transit includesestrous of Bovine mainly synchronizationrecipients embryo proceduces and transfer． and embryo ofdonors，embryoproduction，cryopreservation donors，superovulation bovine transferwere somerelevant The of studied，and keyt