Toll受体mRNA在应用抗生素大鼠体内表达及有关因素相关分析研究.pdf

中文摘要 To ll受体mRNA在应用抗生素大鼠体内的表达 及有关因素相关分析的研究 摘 要 目的：抗生素所致腹泻是抗生素应用过程中发生的一种 副作用。有实验证明抗生素应用可以引起肠道菌群结构紊 乱，细菌易位现象发生及免疫功能受到抑制。本实验采用盐 酸林可霉素制造动物腹泻模型，采用大肠杆菌、活菌制剂干 预，其目的是①采用细菌培养、鉴定、G染色及厌氧菌代谢 产物的气相色谱分析等方法动态观察抗生素致腹泻大鼠 3．14天的肠道菌群结构及远隔器官的细菌易位现象。从微生 态角度出发解释细菌易位现象的发生机制。②利用反转录 聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定抗生素致腹泻大鼠肠粘膜 组织、肠系膜淋巴结(№N)、肝脏、脾脏中Toll—likerecepters 机制(p犹emrecognitionreceptors 的影响，分析抗生素应用，细菌易位及免疫功能的关系。探 讨模式识别受体机制在机体防御机制：天然免疫和获得性免 _ 疫中的重要作用。③采用活菌制剂乳酸杆菌灌胃的方法对 比观察腹泻后菌群结构、细菌易位及免疫功能的变化，以了 r j l 解活菌制剂的干预效应。④采用条件致病菌埃希氏致病性 大肠杆菌灌胃的方法对比观察细菌易位、肠道免疫功能的变 化，以了解抗生素应用造成的二重感染对细菌易位和免疫功 能的影响。 方法：采用健康SD大鼠60只，雌雄各半，体重220一240 中文摘要 克，随机分为A组、B组、C组、D组。A组为抗生素造模 组，共1 天一次，连续7天。于第3、7、14天各处死6只，B组为大 肠杆菌干预组，在抗生素应用的第7天天灌服E．coli2ml(菌 液浓度1×1011c向／m1)，共一次，于2小时后处死。C组为活 菌制剂干预组，共18只。在给与盐酸林可霉素灌胃的同时 给与乳酸杆菌(菌液浓度1×109c如／m1)灌胃，每天一次。 为避免两药之间相互作用，灌药时间间隔4小时。于第3、7、 14天各处死6只。D组为正常对照组，共18只，给与等量 的生理盐水灌胃，于第3、7、1 4天各处死6只。每组又因 分批处死而分为分为N3、N7、N14组，每组各6只。灌胃1 天后各组大鼠就开始不同程度的腹泻，3天后表现为精神萎 靡，毛无光泽，体重下降，继续给予盐酸林可霉素灌胃，各 组大鼠持续腹泻，提示造模成功。 所有大鼠经lO％的水合氯醛(O．3m1／1009)麻醉后打开 腹腔，迅速切去肝脏、脾脏；分离肠系膜淋巴结；截取一小 段近端结肠沿大弯处剪开，用4℃生理盐水冲洗干净，将一 部分标本立即置于Eppendorf管中液氮冷冻，随后于一80℃低 温冰箱保存备提组织RNA；另一部分用以检测易位的细菌。 最后取结肠内容物置于无菌塑料瓶中，经称重、稀释后做肠 一 道菌群分析。采用细菌培养进行菌群分析，逆转录多聚酶链 8 ． 反应(ImPCR)法检测TLR2mRNA和TLR4mRNA的表达 I 水平，结果应用UVP凝胶成像系统成像。所有结果用均数 ±标准差(x±s)表示，菌群分析采用两样本比较的t检验， t01l样受体mRNA组间差异性比较采用单因素方差分析、自 身比较采用q检验，利用SPSSll．O版统计软件包进行统计 中文摘要 学分析。 结果：