人脑胶质瘤白喉毒素受体表达水平与其病理级别相关性的探讨.pdfVIP

·中文论著摘要· 人脑胶质瘤白喉毒素受体表达水平 与其病理级别相关性的探讨 刖 吾 人脑胶质瘤是一种恶性度高的中枢神经系统疾病，术后的化疗是目前治疗胶质 瘤必要手段之一。但由于胶质瘤毛细血管形成的血肿瘤屏障的存在，选择性地转运 化疗药物到达脑肿瘤组织一直是一个难题。近年来国内外研究表明，经脑毛细血管 内皮细胞上的内源性受体介导的药物转运可能是脑内药物转运最有效的方法之一。 toxin 白喉毒素受体(diphtheriareceptor，DTR)，也称作肝素结合表皮生长因子 的膜结合前体(proheparinbinding-epidermalgrowth 206个氨基酸的跨膜蛋白，它可以与白喉毒素特异性结合，通过受体介导的内吞作 barrier， 用使其进入细胞。DTR在平滑肌细胞，血管内皮细胞，血脑屏障(blood．brain BBB)上均有表达。在疾病，如中风、脑肿瘤的条件下，DTR在BBB中的表达大幅 度上调；已经有实验表明，DTR蛋白在许多肿瘤组织中高表达，但在人脑胶质瘤中 是否也有表达并未见文献报道。 研究表明，白喉毒素的无毒突变体—-Cl蝴197，能够作为一种安全有效的人类 疫苗而使用。在对白喉毒素敏感的豚鼠的研究中发现，DTR在豚鼠的脑血管内皮细 胞和胶质细胞中表达，并检测到CRMl97载体蛋白可以安全有效地转运大分子的辣 根过氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP，40kD)通过BBB，这充分证实它可以 作为一种安全有效的载体，介导大分子物质经DTR进行跨细胞转运。上述结果使 我们相信，DTR介导的跨细胞转运可能成为一种更安全有效的脑内大分子药物的 选择性转运途径，从而达到治疗肿瘤的目的。 本研究采用脑胶质瘤患者术后肿瘤组织标本，通过测定脑胶质瘤组织中DTR 的表达水平，与其病理级别相比较，分析脑胶质瘤DTR的表达水平与其病理级别 的相关性，为DTR介导的药物转运方法应用于临床上脑肿瘤的化疗提供实验依据。 材料和方法 一、实验材料 (一)标本 2007年7月到2008年7月间，从中国医科大学附属第一医院神经外科手术 切除的脑胶质瘤中，获得32例新鲜的组织标本。同时收集3例脑挫裂伤手术获得 龄在25到76之间，平均年龄47岁。手术切除的新鲜组织标本立即于液氮中速冻 后，置于．70(2超低温冰箱中保存。所有关于人体的实验均符合赫尔辛基宣言，并 取得了患者的知情同意。 (二)主要试剂 发光法(enhanced CRUZ 羊IgG和二氨基联苯胺(DAB)染色试剂盒均购于北京中杉生物技术有限公司；免 疫组化链霉亲和素一过氧化物酶(SP)试剂盒由福州迈新生物技术开发公司提供。 (三)主要仪器 匀浆机；电子分析天平；恒温震荡水浴箱；台式低温冷冻离心机；紫外分光 光度计；通用电泳仪；转印仪；．70。C超低温冰箱；恒温冰冻切片机；液氮罐。 二、实验方法 and eosin，HE)染色 (一)HE(hematoxylin 根据HE染色结果按照WHO中枢神经系统肿瘤的分类标准(2000)对人脑 胶质瘤进行病理诊断和分级，每个病理级别为一组。 (二)WesternBlot法 测定DTR在各病理级别中的表达水平，分析人脑胶质瘤中DTR表达水平与 2 其病理级别间的相关性。 (三)免疫组化sP法 测定不同病理级别中DTR表达与分布，分析人脑胶质瘤中DTR的表达水平 与其病理级别间的相关性。 (四)图像分析 Western 5500 Blot结果用Chemi V2．03软件扫描，用捷达图像分析系 lmager 统v3．3