RNAi技术沉寂Survivin基因表达及体外诱导人胆管癌细胞凋亡的实验研究.pdfVIP

j鼻中并抽J‘学一漭医掌院 翻lj-|日”乞生掌位论文 导人胆管癌细胞凋亡的实验研究 华中科技大学同济医学院协和医院肝胆外科 博士研究生 左克强 博士生导师 郑启昌 中文摘要 肝外胆管癌(通常称为胆管癌)因早期诊断困难，手术切除率低、预后差 而成为胆道外科研究的热点课题之一。胆管癌是一种发病率很低的恶性肿瘤，但 是近年来有升高的趋势；而且对标准化治疗(包括化学疗法，放射疗法和手术疗 法)的反应较差。因此国内外的研究者对胆管癌发生发展的分子生物学机制十分 关注，进行了大量的研究，而这对于胆管癌的早期诊断，综合治疗和判断预后有 着重要的指导意义。 细胞增殖和凋亡失衡是肿瘤发生发展的重要机制。凋亡调节基因被认为是继 原癌基因、抑癌基因之后的第三类癌基因。Survivin基因是新近发现的凋亡抑制 蛋白(inhibitorofapoptosisprotein，LAP)基因家族的新成员。它的表达产物 具有高度特异性，在胚胎组织高表达，而在正常成体组织，除了胎盘和胸腺之外， 几乎检测不到。但是，在大多数肿瘤组织中却发现有survivin的异常高表达 现象，这—特点为肿瘤诊断及治疗提供了新的靶点。但是国内、外目前有关survivin ，●j—f，ob攀咖晴仑．丈 基因在胆管癌发生、发展以及预后中作用的研究报道极少。 l心陡干扰是生物体保持其自身遗传性状的稳定和调控后生型突变的～种生 理现象．作为一种古老的保护机制，RNAj不仅可以抵御外源有害基因入侵，而且 将其作为一种解读基因功能的研究技术还可能为功能基因组学、基因治疗学等众 多领域带来新的突破。因此，鼢队干扰在理论上有望成为—种新的肿瘤基因治疗 方案。本研究若能证实survivm基因在胆管癌的发生发展和判断预后方面有重要 人胆管癌细胞体外增殖及凋亡的影响，通过沉寂survivm基因的表达，研究survi— vin在抗凋亡信号通路中相关信号分子的变化情况，从而为胆管癌的基因治疗提供 新的理论基础。 第一部分Survivin在人胆管癌组织及胆管癌细胞系中的表达 和意义 一Survivin在人胆管癌组织及胆管癌细胞系中选择性高表达 目的探讨survivm基因在人胆管癌组织及胆管癌细胞系中的表达情况，初步阐明 survivm基因与胆管癌发生发展之间的关系。 方法我们收集了48例人胆管癌组织及相应的癌旁正常组织标本。采用RT-PCR， western 础上，我们用survivin的特异性抗体对所有组织标本进行了免疫组织化学分析。 对照。 blot结果发现66．7％的病人(32例)的癌组织中特异性 结果RT-PCR，western 高表达，而癌旁正常组织中未能检测到sm-vivin表达，而且二者有高度相关性。 blot阳性的癌组织中survi咖 免疫组织化学结果显示，在上述RT-PCR，western 华中科童u弋掌一济曩：学-兜 俘j-I耽生掣啦‘埝文 有非常显著的表达之外，还发现survivin主要在肿瘤细胞中表达，而周围的炎性 高表达，且蛋白表达量和mRNA的表达量一致。 胆管癌发生发展中的一个关键基因，提示survivin可以应用于胆管癌的病理诊断 中。 二Survivin在胆管癌细胞核中的表达提示较差的预后 目的主要研究胆管癌患者中sttrvivin基因表达与预后之间的关系。 方法48例手术切除的胆管癌标本作为研究对象，应用免疫组织化学技术(SP法) 或弱阳性和强阳性。 结果Survivin在胞质和细胞核表达例数分别为26例和22例病人。细胞质中强阳性 表达为12例，而细胞核强阳性表达的则有8例。细胞核强阳性表达的患者平均存活 期为10个月，明显低于弱阳性表达的病人(19个月，p≈0．035)。Cox比例风险率 和远处转移(p--卸．027)． 结论胆管癌中survivin的细胞核表达可以提示较差的预后；