第五章 微生物工程下游加工工程.ppt

一、重要性和特点 重要性 （1）获得商业产品的关键环节 （2）拥有市场竞争力的重要保障 一、重要性和特点 特点 （1）分离系统复杂，杂质多 （2）代谢产物浓度低，稳定性差 （3）代价高，回收率低 二、 基本原理 物理学过程 利用物性差异对包含多种成分的混合物进行分离、提纯。 （1）平衡分离过程（相的组成差别）：蒸气压、溶解度；蒸发（蒸馏、干燥）、结晶、吸附、萃取。 （2）拟平衡分离过程（分离场）：密度、电荷；离心分离、电泳。 （3）非平衡操作（速度差）：分子（粒子）大小、扩散（渗透）系数；超滤，膜透析。 二、基本原理 化学过程 利用化学作用达到分离、提纯的目的，适于高度选择性的精密分离。 （1）分子间作用力：范德华力、氢键、疏水性相互作用力；萃取、吸附层析、疏水层析。 （2）分子识别：酶和底物的专一性结合；亲和层析。 二、基本原理 生物过程 利用生物高分子的特异性相互作用达到分离、提纯的目的，具有高度选择性。 （1）锁钥关系：以蛋白质为代表的生物高分子，能分辨特定的物质，再与其可逆性结合；染料亲和层析。 （2）亲和色谱：利用某些生物物质之间特异的亲和力进行选择性分离的一种色谱分离技术；吸附、洗涤、洗脱、再平衡化。 （一）发酵液的预处理和过滤 1、发酵液的预处理 目的：改变发酵液的物理性质，加快沉降速度；使产物转入以后处理的液相中；除去部分杂质。 处理技术：絮凝、凝聚；稀释、加热。 （一）发酵液的预处理和过滤 1、发酵液的预处理 （1）高价无机离子(Ca2+、Mg2+、Fe3+)的去除方法 （一）发酵液的预处理和过滤 1、发酵液的预处理 （2）可溶性杂蛋白质的去除方法 a. 调节pH（等电点）与阴粒子物质（三氯醋酸盐、水杨酸盐、过氯酸盐等）、阳离子（Ag+、Cu2+、Zn2+、Fe3+、Pb2+）形成沉淀 b. 加入脱水剂（碱金属中性盐），使蛋白质沉淀 c. 加热 链霉素提炼（30℃）和柠檬酸发酵液（80℃）的预处理 d. 加入有机溶剂或表面活性剂使蛋白质变性凝固 e. 使用絮凝剂（无机、有机），例如 β-半乳糖苷酶的纯化 f. 吸附，例如四环类抗生素的提取，可用亚铁氰化锌钾吸附蛋白质 （一）发酵液的预处理和过滤 1、发酵液的预处理 （3）色素物质的去除 色素物质化学性质的多样性增加了脱色的难度。 常用方法：活性炭吸附法、离子交换剂、离子交换纤维。 （一）发酵液的预处理和过滤 2、发酵液的过滤 （1）发酵液的过滤特性——滤饼的比阻值rB （过滤速度） （一）发酵液的预处理和过滤 2、发酵液的过滤 （2）影响发酵液过滤速度的因素 （一）发酵液的预处理和过滤 2、发酵液的过滤 （3）提高过滤性能的方法 （二）微生物细胞的破碎和分离 1、微生物细胞壁的组成及其破碎阻力 （二）微生物细胞的破碎和分离 2、微生物细胞破碎的方法 （二）微生物细胞的破碎和分离 2、微生物细胞破碎的方法 （二）微生物细胞的破碎和分离 2、微生物细胞破碎的方法 （二）微生物细胞的破碎和分离 2、微生物细胞破碎的方法 （二）微生物细胞的破碎和分离 2、微生物细胞破碎的方法 （二）微生物细胞的破碎和分离 2、微生物细胞破碎的方法 （二）微生物细胞的破碎和分离 3、细胞破碎率的测定 （三）沉淀法 微生物工程下游加工工程 1. 盐析法（salting out） （1）原理 高浓度中性盐的加入能破坏蛋白、酶等的胶体性质，中和微粒上的电荷，促使蛋白质等沉淀。 蛋白质的溶解度与盐浓度间的关系可用Cohn方程式表示： logS= β－Ks·I S —— 离子强度为I时的蛋白溶解度 (g/L)； β—— 溶质特征常数，大小取决于不同蛋白质的性 质，也与温度和pH有关； Ks —— 盐析常数，与盐的种类有关； I ——离子强度。 盐析法分离蛋白质时，可分两类： 1）在一定的pH值和温度下，改变离子强度或盐浓度的沉淀方法——“K”分级盐析法 2）在一定离子强度下，改变溶液的pH值及温度的沉淀方法——“?”分级盐析法 （三）沉淀法 微生物工程下游加工工程 1. 盐析法（salting out） （2）影响盐析的主要因素 ①蛋白质浓度 ? 高浓度的蛋白溶液，可减少盐的用量；但共沉现象严重 ?用低浓度蛋白溶液进行盐析，需用较多的盐，共沉作用较轻 ②离子强度和种类 ?盐溶(salting in)： 许多蛋白在低盐浓度下发生盐溶现象（比在纯水中的溶解度大大增加）； ? 高盐浓度则盐析，离子强度越大，蛋白质的溶解度越低； ? 盐析剂种