薯蓣皂苷诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡及作用机制研究.pdf

薯蓣皂苷诱导人胃癌细胞SGC．7901凋亡 及作用机制研究 硕士生姓名：呼明明 指导教师：彭金咏教授 指导小组：彭金咏教授 专业名称：药理学 摘 要 目的：研究薯蓣皂苷对人胃癌SGC．7901细胞的生长抑制作用，并探讨其可 能的作用机制。 方法：首先以lO．羟基喜树碱做阳性对照，MTT法来测定薯蓣皂苷不同剂量 (0、0．65、1．3和2．6 h)对胃癌 pg／rnl，终浓度)和不同时间(12、24、48和72 细胞SGC．7901增殖的抑制作用；AO／EB双荧光染色法从细胞的形态上观察细胞 的凋亡情况；利用流式细胞仪通过AnnexinV．FITC凋亡检测试剂盒检测细胞的早 期凋亡率、晚期凋亡率及坏死率；利用放射免疫测定(Radio．immunityassay砒A) blotting和半定 试剂盒检测Caspase．3和Caspase．8的活化程度；最后采用western 量逆转录聚合酶连反应(Reverse chainreaction，RT·PCR) transcriptionpolymerase necrosisfactor 方法考察相关蛋白Fas、FasL、TNF．Gt、tumor receptorI(TNFRl)、tumor necrosisfactor associated death receptor factor-I(TRAF-1)、Fas—associatedprotein谢tll vimentin及mRNA的表达情况。 结果：薯蓣皂苷可显著抑制胃癌细胞SGC．7901增殖，呈剂量依赖性。作用 48小时后，低浓度的薯蓣皂苷对SGC．7901细胞生长的抑制作用显著高于高浓度 lO．羟基喜树碱的抑制作用。AO／EB荧光染色可以明显看到薯蓣皂苷作用后贴壁细 胞数量明显减少，并出现大量橘红色荧光的凋亡细胞。流式细胞仪测定结果可知， 随着给药剂量的加大，细胞的早、晚期凋亡和坏死率逐渐升高。同时，薯蓣皂苷 可以显著升高细胞上清液中TNF．a的浓度。进一步的机制研究表明，与空白组相 2．78／22．5倍和3．75陀．1 1．3和2．6 rtg／ml的薯蓣皂苷均可显著升高死亡受体相关因子TRAF．1的蛋白表达， 达1．99和1．89倍；薯蓣皂苷亦能上调死亡结构域相关蛋白FADD的蛋白及mRNA 表达。以上结果表明死亡受体通路被激活。此外，与空白组相比，给予2．6 lxg／ml 的薯蓣皂苷能下调抗凋亡蛋白Bcl．2蛋白及Bcl．xlmRNA的表达，分别达2．4和1．4 和1．28倍；下调Bid蛋白及mRNA的表达，分别达9和2倍；促进细胞色素C从 线粒体向胞浆基质中释放，说明线粒体通路被激活。同时薯蓣皂苷能显著下调 皂苷还可显著上调抑癌基因p53的mRNA表达(po．01)及显著下调波形蛋白的 表达(po．001)。 结论：本实验首次发现薯蓣皂苷能显著抑制胃癌细胞SGC．7901的增殖并诱 导其凋亡，并发现薯蓣皂苷的抗肿瘤作用与激活死亡受体通路和线粒体通路有关， 这为薯蓣皂苷的深入研究和开发提供了实验资料，具有较为深远的意义。 关键词：薯蓣皂苷SGC．7901细胞凋亡死亡受体通路线粒体通路 2 1—、‘‘‘‘ inducesinducesthethe ofhumanUman Carcl