人骨髓间充质干细胞与脐静脉内皮细胞共培养构建组织工程骨颗粒的实验研究.pdf

中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院 摘要 目的： 随着骨组织工程由基础研究向临床过渡，面临着血管化的问题。目前构建的组 织工程骨植入体内后血管生长速度不能满足种子细胞营养和氧需要。本实验将脐静 脉内皮细胞与骨髓间充质干细胞作为种子细胞， 观察体外共培养时两种细胞的相 互作用和功能影响，并通过构建组织工程颗粒骨模型，探讨共培养在骨组织工程血 管化研究中的应用。 方法： 1．用密度梯度离心法分离骨髓血中的HBMSCs，通过流式细胞术和多向分化能力对 其进行鉴定。 2．胶原酶灌流消化法获得HUVECs，观察其生长增殖情况，通过免疫组织化学和流 式细胞术对其进行鉴定。 茜素红染色观察共培养对其成骨分化能力的影响。 纯珊瑚+藻酸盐凝胶材料组，分别于l、2、4、6、8、10周取材，组织学染色观察 其成骨及成血管情况。 结果： 1．密度梯度离心法可分离出纯度较高的HBMSCs，高表达间充质干细胞标志CD29、 2．胶原酶消化获取的血管内皮细胞活性好，PECAM一1免疫组化染色阳性，高表达成 熟内皮细胞表面标志CD31，低表达内皮祖细胞及造血干细胞表面标志CD34及血管 粘附分子CDl06。 组形成的毛细血管状结构较单一细胞组多。成骨诱导的HBMSCs去除成骨诱导液后， 共培养组茜素红染色阳性，单一细胞组茜素红染色阴性。 4．体内实验结果显示，共培养组和单纯HBMSCs组成骨良好，随着时间推移支架降 解，骨小梁增多并逐渐成熟。但共培养组并未观察到更明显的血管化，与单纯HBMSCs 组之间的新骨形成情况无明显区别。 中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院 结论： 通过密度梯度离心法可分离获得纯度较高的HBMSCs，经体外培养能保持多向分 在体内成骨良好，但本实验中共培养的HUVEcs在体内存活效率不高，共培养组没 有观察到优于单纯细胞组的新生血管，可能是由于构建的支架材料和方法存在不 足，需要进一步探索和研究寻求更适于共培养体系构建的支架和方法。 关键词： 骨髓间充质干细胞， 内皮细胞，共培养，骨组织工程 4 中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院 Abstract objective： ThelackofafunctionalVascularhas theconstruction supplyhampered of TEBanditsclinical of bed 1arge applicationspoorrecipientvascularity． vascularizationafter 1eadstonutrient Inadequate implantation whichthen cell in 1imitations， resultsin deaththe constructs．Inthis wesetaco—culturemodelofHUVECsand study up HBMSCs， andobservethecellular and interactionfunctionalrelationshiDbetween HUVECsandHBMSCsinvitro．ThenHUVECsimmobilizedwith was alignategels co—culturedwith in