血管内皮生长因子及基因治疗肝硬化门脉高压症大鼠的实验研究.pdf

摘 要 研究背景 在我国肝硬化门脉高压症发病率高，治疗困难，其主要病因为各 种肝炎后肝硬化，占70．80％，现有肝炎病毒感染者大约有l亿7千 万，其中很多可能会发展成肝硬化门脉高压症患者，这将给社会和个 人带来巨大的经济负担。目前治疗主要以手术治疗为主，但不能从根 本上解决问题，最终因病情发展导致肝功能衰竭、消化道再出血而死 亡。研究新的有效的治疗方法非常迫切。近来研究发现，血管内皮生 长因子具有较强较肯定的促血管生成作用，能特异地作用于血管内皮 细胞，促进微血管的形成并增加其穿透性生长能力，为缺血组织改善 血运，提供营养。目前国内外学者已开展了多项利用血管内皮生长因 子及其基因对缺血肢体及缺血心肌模型动物的治疗，显示了良好的治 疗效果。我们以大鼠肝硬化门脉高压症动物模型为研究对象，利用血 管内皮生长因子较强的促血管生成作用，将血管内皮生长因子及基因 导入体内，作用于肝内血管内皮细胞，使其形成新生毛细血管，穿过 纤维隔为假小叶内肝细胞提供足够的营养丰富的门静脉血流，促进肝 细胞再生，改善肝功能。同时因为肝脏门静脉血流的恢复，门静脉向 肝血流阻力降低，门静脉系统压力降低。有望使肝硬化门脉高压症患 者病情逆转，给治疗带来新的希望，从而产生良好的社会效益和经济 效益。 第一部分 四氯化碳综合法制备大鼠肝硬化模型 【摘要】 目的探讨建立一种理想的大鼠肝硬化模型的复制方法并加 以评价，为下一步探索肝硬化门脉高压症治疗方法提供可靠、稳定的 模型动物。方法90只雄性sD大鼠随机分为两组，实验组(70只)采用 四氯化碳+苯巴比妥钠+食用白酒进行诱导，诱导期间四氯化碳浓度在 一定范围内逐步增加，并用食用白酒替代医用乙醇溶液；对照组(20只) 给与普通饮水和饲料，频度及齐Ⅱ量同实验组。同时采用一系列的检查 方法加以评估。结果实验组70只大鼠造模结束时，死亡9只，死亡 率12．86％。实验结束时，按照成模标准，造模成功大鼠共为61只， 均可观察到肝硬化结节及镜下假小叶形成，成模率87．14％。实验组门 静脉压力比对照组明显增高(pO．05)：血清总胆红素、貉丙转氨酶及 谷草转氨酶较正常对照组明显升高(Po．05)，而血清白蛋白较之正常 对照组明显降低(P(O．05)。对照组20只全部存活。结论该方法可 形成稳定的肝硬化门脉高压症模型，可用于肝硬化门脉高压症方面的 相关研究。此模型制作周期短(仅需9周)，成模率高，死亡率低，具有 简便快捷高效的优点，适于大批量制作。 l关键词1大鼠，动物模型， 肝硬化， 门脉高压症， 四氯化碳症 Il 第二部分 静脉应用觑管内皮生长因子治疗肝硬化门脉高压症大鼠的实验研究 f摘要】 目的：探讨静脉应用血管内皮生长因子(ⅦGF)是否对肝硬化 门脉高压症大鼠有效。方法40只肝硬化门脉高压症造模成功s—D大 鼠，全部雄性，随机分为2组，其中24只为实验组，其余16选为对 照组，VEGF n—12； 静脉注射，共用7d(实验组ln_12；对照组ln_8)和14d(实验组2 对照组2n=8)。于治疗后8d和15d两个时间点分别检测门静脉压力； 肝功能及血液细胞；并处死动物取下肝脏标本，免疫组化(SABC)法检 测肝组织VEGF分布及微血管密度帅)的变化。结果：治疗后8d， 1组实验组与对照组比较，实验组有较高的微血管计数及VEGF分布， 门静脉压力下降，肝功能改善及血液细胞增加；但无统计学意义；治疗 后15d，2组实验组与对照组比较，实验组有更高的微血管计数及 ⅦGF分布，门静脉压力显著下降，肝功能改善及血液细胞增加；而且差 异均有显著性；(po．05)；1，2组试验组之间差异无显著性。结论：本研 究显示，静脉应用VEGFl4d能够促进肝微血管形成，显著降低门静脉 压力；明显改善肝功能并使血液细胞增加。 【关键词】血管内皮生长因子， 肝硬化， 门脉高压症，微血管， 学 羲 密度(MVD) Ⅲ 第三部分 【摘要】 鼠肝组织mRNA及ⅦGF的表达水平和血管形成效果。方法：肝硬 空载质粒。术后8、15、22天分别检测门静脉压