抗纤溶酶抗体在抗磷脂综合征发病机制中作用.pdfVIP

摘要 中文摘要 第一章 纤溶酶诱导抗磷脂抗体及其致病性的研究 中文摘要 目的研究用纤溶酶免疫获得的抗纤溶酶抗体是否可以结合其他抗 磷脂抗体相关的自身抗原以及抗纤溶酶抗体的致病性。方法用天 然的人纤溶酶免疫小鼠，获得免疫的小鼠血清和制备并纯化出10 株抗纤溶酶单克隆抗体，用固相酶联免疫吸附(ELISA)法检测免 疫小鼠血清及单抗对纤溶酶、心磷脂、B2糖蛋白I、活化蛋白C、 凝血酶和组织型纤溶酶原活化物(t．PA)的识别，检测了单抗对凝 血时间的影响。单抗5E9和5C5用于诱导BALB／c小鼠的流产模型， 用抗C3b／C3c抗体行免疫组化检测活化补体对胎盘的损伤作用。结 果用纤溶酶免疫获得的10份小鼠m清中，可以识别纤溶酶(10／10)、 和组织型纤溶酶原激活齐J(5／10)。在所有的10株单克隆抗纤溶酶抗 体中，1株与B2糖蛋白I和凝血酶，1株结合活化蛋白C，l株结 合t-PA，在胎牛血清封闭的心磷脂检测实验中有三株对心磷脂有结 上海置通太学2006届博士硷工 摘要 试验所矫正，呈现狼疮抗凝物特性；5C5和5F10能降低纤溶酶的 水解活性。在体内实验中，单抗5E9和5C5能增加孕鼠的死胎率， 5E9和5C5单抗均能降低小鼠的胎盘和胎鼠的重量，免疫组化显示 了这两株抗纤溶酶抗体处理后的小鼠胎盘的绒毛膜和蜕膜的问质 血管有活化的补体C3沉积。结论纤溶酶是一种新的抗磷脂抗体的 靶抗原，纤溶酶可能与其他参与凝血和纤溶的分子存在共同抗原表 位，导致了抗纤溶酶抗体与B2糖蛋白I、活化蛋白C、凝血酶和 t-PA之问的交叉反应。本文提示抗纤溶酶抗体在体内、外均可促进 血栓的形成，且发病过程有补体活化途径参与。 关键词：抗原；抗体； 自身免疫；疾病 第二章 抗纤溶酶抗体识别抗原的结构域的研究 中文摘要 目的克隆、纯化出纤溶酶结构域的原核表达蛋白，并鉴别抗纤溶酶抗 体识别的主要结构域。方法使用PCR的方法扩增了纤溶酶的5个 domain，SPD)， Kringle结构域和丝氨酸蛋白酶结构域(serine protease 上海交通夫挚2006届博士论文 摘要 印迹法检测了病人来源的单克隆抗体CLl5和多抗血清对不同结构域 的识别。结果成功克隆了纤溶酶的6个结构域，并获得纯化的原核表 核表达并纯化表达了6个纤溶酶结构域，并证实APS病人中的自身抗 体主要识别SPD结构域。 关键词：纤溶酶，结构域，克隆 第三章 抗纤溶酶抗体表位的生物信息学分析 目的运用生物信息学和计算机辅助设计分析高亲和力抗纤溶酶单抗 CLl5的表位，并鉴定其所识别的主要表位肽。方法根据CLl5的抗 体的抗原决定簇CDR区的已知序列，在PBD蛋白库中进行同源比较， 获得了同源性较高的单抗1MFA的Fab段的晶状结构，用计算机软件 CLl5进行对接。获得CLl5和纤溶酶丝氨酸蛋白酶结构域(serine protease 用能量，结合已知的信息和对SPD的表位预测结果，设计了3段在酶 活性中心附近的抗原表位肽。并检测了单抗对表位肽的结合能力和多 肽对CLl5结合纤溶酶的抑制效应。结果通过对CLl5的晶体结构的 上海交通夫学2006届博士论文 摘要 同源模建，计算机模拟与SPD结合，CLl5在纤溶酶的酶活性区的 606～789中的部分氨基酸)T-歹0有明显的相互作用，存在表位为空间构 象，能将纤溶酶的SPD活性中心屏蔽。在列‘所设计的表位肽A629—644 溶酶的结合