利用基因剔除和转基因技术研究RIG-K和PC-1基因功能.pdf

{·海第一仄罩}人学搏I学托}垒立 模式生物技术在痰病相关基因功能研究中的应用—— RIG-K基因剔除和PC．1转基因小鼠系的建立及其初步研究 研究生： 骆惠均 导 师： 王铸钢教授 中文摘要 急性早幼粒细胞白血病(acute leukemia，APL)约 promyelocytie 占成人急性髓系白血痛的10％．15％。临床表现极其凶险，约80．90％ 的病人表现严重出血或嚣散性血管内凝血，死亡率较高．上海血液病 trans—retinoic 研究所从八十年代中期开始应用全反式雏甲酸(all acid，ATRA)治疗急性早幼粒细胞白血病，临床缓解率达90％．95％， 是目前临床上治疗该类型白血病的标准方案。ATRA治疗APL获得成 功，使APL成为肿瘤诱导分化治疗的经典范例。APL的发生通常涉 及到维甲酸受体RARa与其他染色体上的一些基因发生相互易位，染 色体易位所产生的融合蛋白对APL的发生起着关键的致病作用．这 cz 等的致病作用被认为是干扰了相对应的野生型基因产物如RARct和 pML的功能，直接或闻接地导致了APL酌发生． 那么，ATRA和RARtt结合后，究竟调控哪些基因的表达?这些 基因的表达与否对细胞的增殖，分化和癌变究竟起什么样的作用?对 这些问题的回答对于我们理解APL发病机制和ATRA作用机韦lj具有 十分重要的意义。上海血液病研究所以APL细胞株NB4为模型，采 subtraclive 用抑靠0消减杂交(Suppression PCR)等技 微阵列(mieroarray)和差异显示PCR(Differential display 术，在经ATRA处理的NB4细胞分离到】69个受ATRA调控的基因， 3 上海第二医科入学博』+学位论义 其中8个是首次发现的新基因，分别命名为RIG-A、一B、一C、一D，-H、 acidinduced ．I、．K和．L(Retinoic mRNA水平明显上调，48小时后达到 低，经ATRA处理后，RIO．K 高峰。进一步的研究显示，RIG．K的表达与ATRA诱导NB4细胞的 分化相关，以核酶阻断RlG．K的表达，可以使ATRA诱导的NB4及 HL60细胞分化部分受阻。这些结果均提示RIG．K可能是受维甲酸调 控的与细胞分化相关的新基因。 通过对GenBank非冗余数据库的搜索，发现RIG．K与一个新发 现的小鼠蛋白palladin具有显著的同源性。进一步对核酸序列扫蛋白 质序列进行比较分析，发现palladin就是RIG．K在小鼠中的同源基因。 Palladin是一个细胞骨架相关蛋白，与张力丝的形成和细胞粘附有密 切关系。同时另有实验提示，palladin在神经突的生长过程中有重要 作用．Palladin在胚胎时期各种组织都有表达，但在某些成体组织中 则表达下降或几乎不表达。这些现象说明palladin可能参与了胚胎发 育的某些过程。 为了进一步研究RIG．K在细胞增殖、分化和胚胎发育中的作用， 我们决定建立RIG．K基因别除小鼠．通过筛选噬菌体文库，我们得 到一段长l8kb的129Sv小鼠基因纽序列，包含了RIG．K基因的第14、 15、16、1 7、1