CIK细胞对人胃癌裸鼠腹膜移植瘤细胞增殖、凋亡及E-钙粘素、β1整合素表达影响实验研究.pdf

中文摘要 CIK细胞对人胃癌裸鼠腹膜移植瘤细胞增殖、漏 1整合素表达影响的实验研究 亡及E．钙粘素、B 摘 要 目的：胃癌是消化道中发病率和死亡率均占第一位的 恶性肿瘤。近年来，胃癌术后腹膜种植转移复发的严重性 日渐突出，治疗棘手，已成为患者死亡的主要原因。研究 表明，胃癌细胞增殖能力及其表面粘附分子在侵袭转移过 程中起至关重要的作用。最新发现细胞因子诱导的杀伤细 killer，CIK)具有较其它过继免疫细 胞(Cytokine-induced 胞制备简易、增殖快、杀瘤谱广、活性高等优点，临床应 用前景广阔。但关于CIK细胞对胃癌腹膜移植瘤细胞增 殖、凋亡及其粘附分子表达影响的研究尚未见报道。本实 验通过体外培育正常人CIK细胞、建立人胃癌裸鼠腹膜移 植模型，研究腹腔应用CIK细胞对胃癌腹膜移植瘤细胞增 殖、凋亡以及侵袭转移过程中粘附分子E．钙粘素、B1整 合素表达的影响，探讨CIK细胞对胃癌腹膜种植转移的作 用机制，为临床应用CIK细胞治疗胃癌腹膜转移、改善预 后提供理论依据。 材料与方法： I CIK细胞的制各：提取人外周血单个核细胞(PBMC)， 白介素一1q(interleukin．1 Q，IL．1 a)等细胞因子共同培 中文摘要 育制备CIK细胞。 nu／nu裸鼠无 2人胃癌裸鼠腹膜移植模型的建立：Balb／c 特殊病原动物(SPF)环境喂养。传代培养人胃癌高侵袭 转移细胞株OCUM．2MD3，裸鼠腹腔注射5×logo．2ml／ 只的癌细胞，建立人胃癌裸鼠腹膜移植模型。 3分组：制模后第21天，取裸鼠48只，随机分为实验组 和对照组。实验组根据不同的干预时间，随机分为CIK】、 3、5天组(CIK 1天组于第1天，CIK 1、3、5day)，CIK 3天组于第1、3天，CIK5天组于第1、3、5天分别腹腔 注射4×107／o。2ml／只的CIK细胞；对照组随机分为生理 盐水1、3、5天组(NS l、3、5day)，各组每只分别腹腔 注射0．2ml生理盐水。 4取材方法：各组均在末次注射24小时后取材，脱颈椎 处死裸鼠，肉眼观察腹膜移植结节情况，均取大网膜处移 植瘤结节，分别用10％中性福尔马林、4％戊二醛、70％ 的酒精固定，进行相应项目检测。 5观察内容：肉眼、光镜、透射电镜观察腹膜移植瘤组织 形态学变化；流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测瘤 细胞增殖周期中Go／G}、S、G2／IVl期细胞比率、凋亡率、 计算细胞增殖指数(Proliferation index，pI)，并检测粘附 分子E．钙粘素、届1整合素表达变化，分析探讨CIK细胞 对上述指标的影响及其相互关系。 结果： 1正常人PBMC在体外用抗CD3McAb、】L．2、IFN—Y、 IL—l Q等细胞因子培育可成功制备CIK细胞。 2裸鼠腹腔注射人胃癌高侵袭转移细胞株OCUM．2MD3 中文摘要 可成功建立胃癌裸鼠腹膜移植模型。 3形态学观察： 3．1肉眼观察：对照组各组腹腔内弥漫灰白色结节，瘤组 织块大，表面粗糙，质脆易脱落。实验组呈现不同程度的 结节数量减少、体积缩小。 3．2光镜观察：对照组各组均可见瘤细胞增殖旺盛，细胞 核大，深染，病理核分裂像增多。实验组各组瘤细胞出现 不同程度的坏死、退变，周围有淋巴细胞浸润。 3．3透射电镜观察：对照组各组瘤细胞核大，核畸形，核 质比例失调。实验组各组瘤细胞呈现不同程度的体积缩 小、胞浆和细胞核浓缩、核异染色质边集呈半月形、核碎 裂等凋亡形态学改变。 4C