Survivin反义寡核苷酸对肝细胞癌细胞中Survivin基因表达影响.pdfVIP

中文摘要 su-rvivin反义寡核苷酸对肝细胞癌 细胞中suI．、，ivin基因表达的影响 摘 要 ／。● 溥 背景：肝细胞癌(hepatocellul2ur 国最常见的消化系统恶性肿瘤之一，恶性程度高、侵袭力强、 预后差、病死率高。因此研究肝细胞癌的发病机理以及探讨 新的可行的治疗方案具有极其重要的临床意义。近年来关于 肝细胞癌的治疗方案日趋完善，其中反义核酸技术作为一项 新的基因治疗方式和途径受到人们的广泛关注。反义核酸技 术的主要作用机制是反义核酸能与ITl】州A结合，抑制rnJ刚A 的翻译，从而特异性地封闭靶基因，进而影响和调节靶基因 的表达。 生存素(su丙ivin)是近年来发现的细胞凋亡抑制蛋白 (inhibitor of印optosis 断细胞的凋亡，在肿瘤发生发展过程中发挥着重要作用‘。 suⅣivin仅特异性地表达于多数恶性肿瘤组织中，而在相应 正常成人组织中几乎不表达，这种选择性表达特性使其成为 目前恶性肿瘤诊断和治疗的新靶点。 目的：本研究通过利用反义核酸技术原理，设计合成 survivin反义寡核苷酸(survivinASODN)，并将其转染于肝 ASODN转染于 况，探讨利用反义核酸技术将survivin 为肝细胞癌的基因治疗开辟新的途径，并为之提供理论基础 中文摘要 和实验依据。 ASODN及相应的正义 方法：1设计合成特异性survivin 对照寡核苷酸(survivin 细胞为靶细胞，将不同浓度的反义寡核苷酸及正义寡核苷酸 作为阻断剂对靶细胞进行转染，48h后收集细胞。 2提取细胞总RNA，采用逆转录．聚合酶链反应 (ImPCR)方法检测转染后各不同浓度转染组及各对照组中 survivin mRNA表达的变化。以B．actin作为内参照标准，对 扩增产物通过凝胶扫描仪进行DNA电泳条带的光量子强度 mIⅢA表达水 分析，将survivin与B．actin比值作为survivin 平的参数，对survivin产物相对定量。 ASODN对SMMC．7721纽胞中survivin蛋白表达的影响。 Reagent为载体的不同浓度各转染组细胞内均见到清晰的绿 色荧光，转染效率均达到80％，并且随着转染浓度的增加而 增加，其中1ooOnmol／L反义寡核苷酸转染组转染效率达到 80～90％，而在各对照组细胞内未见到绿色荧光。 2在SMMC一7721细胞中survivinm】[矾A表达变化的研 ooOnmol／L ooOnm01／L 和1 ASODN转染组、1 SODN转染组、 空脂质体组及空白对照组吸光度比值分别为：3．21±O．08， 其中各ASODN转染组细胞survivinmRNA表达量均低于各 中文摘要 浓度增加而明显减少，呈现剂量依赖性。而正义对照组、空 脂质体组及空白对照组之间相互比较，SMMC．7721细胞中 的survivinmRNA表达量差异无显著性(尸O．05)。 3survivin寡核苷酸作用于SMMC．772l细胞后，ASODN 1．15±O．04和1．20±O．oo。各survivinASODN转染组中 suⅣivin蛋白表达量均低于