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人胚神经干细胞体外分化的实验研究 中文摘要 中文摘要 人胚神经干细胞体外分化的实验研究 目的：神经干细胞是近来神经科学研究的一大热点，其分化尤其是定 向分化问题是热点中的热点。决定神经干细胞分化方向的因素很多， 近来研究发现很多细胞因子、神经干细胞所处局部微环境、神经干细 胞本身产生的多种调控信号及某些特定基因均决定着神经干细胞的 分化方向。本研究对人胚神经干细胞在成人脑脊液中的分化，及抗坏 【_『『|酸的对其定向诱导分化作用进行了初步研究，并探讨了其一J能机 制。 方法：将体外原代培养的人胚来源的神经干细胞置入含有正常成人脑f )c寸分化的细胞进行免疫细胞化学染色，计数产生的各类神经细胞的比 例。将人胚中脑来源的神经干细胞体外长期培养，每隔5—7天传代一 次。取不同代数的神经干细胞，种植入含有血清分化培养基 化寸·天后，以免疫细胞化学方法观测其分化细胞中TH(+)细胞的比 例。 结果：f1三常成人脑脊液能诱导人胚来源的神经千细胞分化成神经元， 星型胶质细胞，少突胶质细胞，与其在胎牛血清中的分化相比，星型 胶顾细胞比例增多P(O．05，而其他类型细胞比例无显著性差异。人 人胚神经千细胞体外分化的实验研究 胚中瞄来源的神经干细胞体外血清诱导分化后所得TH(+)细胞随细 胞传代次数的增加而减少。原代神经球(P。．)体外分化后所得TH(+) 后所得TH(+)细胞比例(0．01％。不同浓度的抗坏血酸能增加符代 神经球分化成多巴胺能神经元的比例。101M的抗坏血酸比其它浓度 的抗坏血酸更能增加人胚中脑来源的神经干细胞分化成多巴胺能神 经元的比例。原代培养的人胚中脑来源的神经干细胞在加了101M的 抗坏向酸体外分化十天后所得TH(+)细胞比例可高达12．8％±1．9％， 显著高于单用胎牛血清诱导所得。早期加入抗坏血酸(3天以内)比 晚期加入(5天以后)更能增加人胚中脑来源的神经干细胞分化成多 匕胺能神经元的比例。 结论：神经干细胞在脑脊液这样的环境中可以存活和分化，这是神经 干细胞的移植治疗的重要依据。抗坏血酸体外能显著增加胚胎中脑来 源的神经干细胞分化成多巴胺能神经元的比例，以101M的抗坏血酸 预先处璀胚胎中腑来源的神经干细胞能使其体外分化产生更多的多 巴胺能神经元。 关键词：神经干细胞 脑脊液 分化抗坏血酸 多巴胺能神经元 硕士研究乍： 卞林 导师：惠国桢教授 人胚神经干细胞体外分化的实验研究 英文摘要 in on vitro of The the differentiationfetal experiments brainderivedneuralstemcells fetalbrainderivedneuralstemcells observethe objective：To and inthenormaladult fluid the differentiation cerebrospinalinvestigate to theroleofascorbicacid investigate mechanism，and potential eells’differentiationinto inneuralstem