错配修复基因hMSH2与突变型p53在胃癌中表达.pdfVIP

中文摘要 错配修复基因hMSH2与突变型p53 在胃癌中的表达 摘 要 目的：遗传物质的突变是导致人类许多疾病的主要原 因，而引起遗传物质突变的直接诱因是不同类型的DNA 损伤，其中多种原因造成的DNA双链分子的碱基错配是 导致突变的主要DNA损伤类型之一。大量研究表明，从 细菌、酵母到人体细胞都存在一种能修复DNA碱基错配 的安全保障体系，这种保障体系是由一系列特异修复 DNA碱基错配的酶分子组成，被称为DNA错配修复系统 (DNAmismatch repairsystem．]VflVlR)。它包含了若干的错 配修复基因，其编码的错配修复蛋白可相互作用形成一种 多聚复合物，参与细胞错配修复反应。错配修复反应既可 以修复DNA复制过程中出现的碱基错配，又可以消除由 于含简单重复序列的同源序列之间的遗传重组出现的不 配对碱基序列，这样可有效的防止DNA复制差错的产生， 保持遗传物质的完整性和稳定性，避免遗传物质发生突 变，保证DNA复制的高保真度。人体细胞中DNA错配 修复反应过程依赖于这几种人类错配修复基因产物的参 与，其中任何一种基因发生突变导致其产物功能的丧失都 将造成DNA错配修复功能的异常、缺陷或丧失，从而导 致DNA复制中碱基错配率升高，诱发癌基因激活或抑癌 基因失活导致细胞癌变。近年来，对错配修复的研究进展 飞速，国内外学者对错配修复基因与肿瘤的关系，特别是 中文摘要 对家族性遗传性非息肉型结肠癌(HNPCC)中错配修复 基因的研究尤为深入，大多数研究者提出在HNPCC肿瘤 的发生过程中，近70％．90％是由于hMSH2和hMLHl这 两个MMR基因突变所造成的，现已基本确定，MMR基 因发生突变导致DNA错配修复系统缺陷或丧失是 HNPCC肿瘤发生的重要因素。除此以外，对于其它类型 肿瘤组织中的MMR基因的检测表明，虽然有MMR基因 突变的存在，但其突变率远较HNPCC肿瘤中的突变率为 低，并且对MMR基因的突变对HNPCC以外的肿瘤的影 响作用的研究也只局限在几种肿瘤组织上，研究范围较 小。本研究是在上述研究基础上，针对胃癌患者提取其正 常组织及肿瘤组织中的DNA，扩增错配修复基因hMSH2 的外显子，观察肿瘤组织与正常组织hMSH2的突变情况。 同时探讨其与肿瘤组织突变型p53表达的关系。旨在通过 对上述问题的研究，探讨错配修复基因的突变在胃癌发 生、发展中的作用。 方法：以酚．氯仿提取法提取胃癌患者的肿瘤组织及 正常组织的DNA(n=50)，采用PCR的方法扩增hMsH2 基因第1、3、5、12外显子。PCR反应组成：模板DNA5 2．5 1．t 1 ul，lO×bufferul，上下游引物各0．5l，dNTPSu l，Taq酶2U，反应总体系为25“l；循环条件：预热94 ℃2分钟，变性94℃45秒，退火55．57℃45秒，延伸72 。C30秒，共34个循环。通过单链构象多态性分析结合银 染和EB染色的方法找出染色异常的条带，并通过重复实 验证实。用免疫组织化学染色方法检测胃癌组织中突变型 p53蛋白表达情况，应用X2检验进行统计学分析。 中文摘要 结果：PCR-SSCP银染及EB染色结果显示：胃癌患 者hMSH2基因第5外显子出现4例突变，第12外显子出 现5例突变，突变率为18％(9／50)。免疫组织化学染色 结果显示突变p53染色阳性者21例，占总例数的42％ 染色阴性，占58％(29／50)，其中2例患者存在hMSH2 基因突变。hMSH2基因突变在突变型p53阳性表达的患 者中突变率为33．3％(7／21)，在突变型p53阴性表达的患 者中突变率为6．9％(2／29)，经统计学处理，p0．05，有 显著差异。 结论：通过对胃癌患者肿瘤组织中错配修复基因 hMSH2突变情况及突变型p53蛋白表达情况的研究，表 明在胃癌患者中错配修复基因hMSH2的突变主要在肿瘤 组织中，而正常组织突变甚少，提示：hMSH2基因的突 变可能是胃癌发生的重要原因之一。在正常组织中， hMSH2基因突变率低，表明并非遗传