树突状细胞促进LAK细胞对小鼠卵巢癌抑制作用实验研究.pdf

中文摘要 树突状细胞促进LAK细胞 对小鼠卵巢癌抑制作用的实验研究 摘 要 目的：本研究在体外利用小鼠卵巢癌OVHM肿瘤细胞 抗原致敏小鼠树突状细胞，并与小鼠LAK细胞共培养，研 究肿瘤抗原致敏的DC对LAK细胞体内外抗肿瘤作用的影 响，为临床综合利用DC和LAK细胞治疗肿瘤提供实验依 据。 方法：1取对数生长期的OVHM细胞制备肿瘤抗原。 2DC的制备和鉴定：从小鼠腿骨中获得骨髓细胞，加入抗 1 CD4、抗CD8a、抗B220、抗Terl9和抗CDllb单克隆抗 体，应用免疫磁珠阴性筛选法(Mini—MACS)去除粒细胞、 T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞和巨噬细胞，rmGM—CSF 和rmlL．4体外培养，以获得大量高纯度DC。在DC培养过 程中加入小鼠0V瑚Ⅵ卵巢癌细胞冻融抗原致敏DC。流式细 胞仪检测DC的免疫表型，ELISA法检测DC培养上清分泌 的细胞因子IL一12。3LAK细胞的制备和激活：无菌制备小 鼠脾细胞悬液，利用梯度密度离心法收获脾淋巴细胞，体外 细胞共培养，收获DC。LAK细胞。4DC诱导LAK细胞的体 外杀伤实验：效应细胞分为小鼠脾淋巴细胞组、单纯LAK 细胞组和与肿瘤抗原致敏DC共培养LAK细胞组 靶比为1 中文摘要 体外杀伤活性。5动物实验：将小鼠OVHM卵巢癌细胞 雌性小鼠右前肢腋窝皮下建立肿瘤模型，并随机分为四组， 即：对照组(单纯注射PBS)、LAK治疗组、肿瘤抗原致敏 DC治疗组、DC—LAK治疗组，每组6只。治疗从荷瘤第2 细胞，记数调整细胞浓度为1×108／ml，O．1ml／只，荷瘤周围 皮下注射。从荷瘤第6天开始，每隔2天测一次肿瘤大小， 按公式V=Ttab2／6计算瘤体积，第30天处死小鼠，剥离肿瘤 组织称重并观察各组抑瘤效果有无差异。 ％)的DC，平均每只小鼠收获DC细胞1．5×106。电子显微 镜观察：DC表面突起多样化，细胞呈树突状。流式细胞仪 检测：肿瘤抗原致敏的DC与未用肿瘤抗原致敏的DC比较 而未用肿瘤抗原致敏DC的培养上清中检测不到细胞因子 IL．12。2 LAK细胞增殖显著，培养7天可扩增5--一6倍。3效 应细胞与靶细胞为50：1时，小鼠脾淋巴细胞表现出很弱的 胞有较强的杀伤肿瘤细胞的活性(46．73士6．71％)，两者相 有最强的杀伤作用(79．66士4．82％)，与其它两组比较，差 异均有显著性(尸O．01)。4动物实验分为4组：对照组(单 中文摘要 生长抑制率为：48．16％、82．85％和93．81％。各组肿瘤体积 分别为： 3．773+0。163、1．1 差异(尸O．01)。 结论：1小鼠骨髓细胞应用免疫磁珠阴性筛选方法在去 除粒细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、单核细胞 瘤细胞冻融抗原致敏，可扩增高纯度成熟DC。2肿瘤冻融 抗原致敏的DC与LAK细胞共培养后可明显提高LAK细胞 特异性杀伤小鼠卵巢癌细胞的作用。3通过小鼠卵巢癌荷瘤 实验证实肿瘤冻融抗原致敏的DC能够增强LAK细胞抗肿 瘤作用。 关键词：树突状细胞；淋巴因子激活的杀伤细胞：卵巢 癌；肿瘤冻融抗原；杀伤活性 英文摘要 An ofenhancement experimentalstudy killerinhibite to murrain lymphokine—activated ovariantumordendriticcells by ABSTRACT areinoculatedmouseovariantumor Objective