干血点采样技术和干血浆采样技术在麦考酚酸代动力学测定中应用.pdf

摘要 摘要 将全血样品收集在卡纸上，即干血点采样(DBS)；将血浆样品收集在卡之上，即 干血浆采样(DPS)。国外文献报道：这两种方法在血样采集方面比传统方法有一定的 优势：需求较少的血量，可减少动物使用，方便血样采集、存储运输，简化样品前处理。 方法，将在药代动力学研究中得到越来越多的应用。但DBS、DPS方法学并不是十分成 熟，对于DBS、DPS法和蛋白沉淀法综合对比并结合临床药代动力学数据分析的研究极 少。 麦考酚酸(MPA)是一种免疫抑制剂，常用于预防同种肾移植病人的排斥反应及治疗 难治性排斥反应，降低自身免疫。 本论文研究的目的是：通过在DBS和DPS实验过程中对比不同的样品处理方法， 蛋白沉淀法处理MPA临床实验的血样后，分析其药代动力学数据，总结DBS和DPS 法实际应用意义。比较DBS、DPS法和蛋白沉淀法，总结其优势与不足。 Xcaliber HPLC．MS／MS分析，色谱柱采用EeosilC18柱，柱 1．2数据处理系统的TSQ 温为30℃，流动相为乙腈：甲醇：0．01 rain和7．33 速为0．4mL·rain一，MPA和比格列酮的保留时间分别为6．81rain，仪器运 rain(2rain之前和8．4 行时间为8．6 式检测，毛细管温度为280℃，鞘气压力为40 eV， psi，辅助气压力为10psi，碰撞能26 m／z 选择离子为MPA 338．2[M+NH4]+一n比207．2，吡咯列酮m／z 134．1。 对于一些可能影响DBS和DPS方法的一些因素如：点卡体积、打孔位置、提取液 的比例和提取方法等都做了分析比较。结果显示：1．O 10 laL、15 lag·mLd浓度的MPAlaL 和20“L不同的点卡所测得的结果基本相同(P0．05)，点卡体积对结果没有显著的影响， m 摘要 选择20“L为点卡体积；边缘打孔的响应值比中心打孔的要高10％左右，但其精密度要 差4％左右(边缘打孔精密度为9％，中心打孔精密度为5％)，选择中心打孔；单变量对 得结果，所测得结果相近，精密度相似，甲醇：水=25：75回收率虽略高但提取液呈红 色，过固相萃取柱也不能滤去，同时对比了加入适量甲酸(含量为0．1％)和不含甲酸的 提取液，结果为不加甲酸的提取率略高，所以提取液选为不含甲酸的甲醇：水=50：50； 对比不同提取方法，超声10rain和30 rain和30 miIl、涡旋提取10 min所测得平均浓度 相近，精密度相似，基于简化实验，最后选择超声10min为提取方法。 法灵敏、可靠、专属性强，可以满足药代动力学研究要求。 方法灵敏、可靠、专属性强，可以满足药代动力学研究要求。 方法灵敏、可靠、专属性强，可以满足药代动力学研究要求。 FTA卡很适合DBS和DPS方法学的确定。 根据临床药代动力学实验数据得出结论，DPS方法和蛋白沉淀法所得实验数据基本 相同，但DBS法与DPS法和蛋白沉淀法有较大的差距，可能因为DBS法用全血点卡， 由于血浆蛋白结合率的个体差异导致所测得的实验数据的差异。DBS方法和DPS法其 优势在于取血量少，储存运输方便，在一些药物的药代动力学分析中能完全代替一般的 蛋白沉淀法。 关键词：干血点采样，LC．MS／MS，药代动力学