实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠穹窿下器形态学观察.pdf

中文摘要 实验性变态反应性 脑脊髓炎大鼠穹窿下器的形态学观察 摘 要 目的：对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)不同 时期的穹窿下器(SFO)进行形态学观察，探讨该室周器官 在EAE发病过程中的作用。 方法：选择健康雌性Wistar大鼠90只，体重180—2209， 6h 随机分为5组：①对照组(n=18)：不做任何处理；②EAE 组(n=18)：为柔膜反应组；③EAE7天组(n=18)：为潜伏 21 期组；@ZAZ14天组(n=18)：为发病极期组；@ZAE 天组(n-18)：为恢复期组。 l EAE模型制备：用豚鼠脊髓匀浆加完全福氏佐剂，主动免 疫Wistar雌性大鼠，在免疫后6小时，7天，14天，21天 四个时间点，常规经心灌注、固定，取脑。分别以HE染色、 扫描电镜、透射电镜、TUNEL组化染色，观察穹窿下器的 形态学变化。 2光镜标本制备：常规经心灌注，取脑，冠状方向去除视交 叉以前和漏斗柄以后部分，取中问脑块，常规石蜡包埋，连 续石蜡切片，片厚5lam。常规HE染色，封片。显微镜观察、 照相。 3电镜样品制备：麻醉、灌注同光镜标本制各，但灌注液为 1．5％的多聚甲醛和2．5％戊二醛磷酸缓冲液。在距离脑底面 3mm处做一水平切口，将脑块分为背、腹两半，在背侧半的 腹侧面观察到室间孔后，在室间孔前2mm、后3ram处各做 中文摘要 一道冠状切口，将腹侧问脑结构掰掉，所暴露的凹弧面为第 三脑室顶面，其正中的小丘状突起为SFO。PBS冲洗，梯度 酒精脱水，叔丁醇置换，二氧化碳临界点干燥，真空喷金， 日立S。520N观察、照相。 透射电镜样品制备与扫描电镜样品制备相同，取下 SFO，放入4％戊二醛中保存，1％锇酸后固定，Epon812包 埋，切片，T-3500N透射电镜观察、照相。 4标示凋亡细胞：石蜡切片，片厚4um，常规脱蜡至水，蛋 白酶K消化，0．3％H202甲醇液封闭，冰上透化后加TUNEL 反应液，POD转染，DAB显色。苏木素复染，脱水、透明， 封片。显微镜观察、照相。 结果：1光镜观察结果：对照组SFO室管膜细胞表面光 滑，室管膜细胞单层排列，未见淋巴细胞样细胞，凋亡细胞 2_31)，室管膜细胞出现复层；潜伏期组的穹窿下器凋亡细胞 比前期增多(19．33±2．08)，可见核深染的小圆形淋巴细胞 样细胞增多；发病极期组，细胞肿胀，血管扩张，血管周围 存在大量淋巴细胞样细胞，呈现典型的“套袖样”改变，SFO 凋亡细胞数量最多(24．67±6．79)，主要分布于血管周围：恢 复期组血管“套袖样”病变开始恢复，细胞浸润减轻，病灶数 量减少，凋亡细胞数量较发病极期减少(9．33±1．76)。TUNEL 阳性细胞在EAE后6h组增加，与对照组比较差异显著 fP0．05)，14天达高峰。发病极期及7天组与对照组比较有 显著差异(P0．01)；恢复期与对照组比较无显著差异性(P O．05)。 2扫描电镜观察结果： 中文摘要 2．1正常对照组：SFO表面纤毛稀少，与周围脑室界限清楚， 室管膜细胞界限清晰，呈鹅卵石状隆起排列，形状规则，直 径4岬．109rn不等，突向脑室腔。室管膜细胞表面可见密集 的微绒毛，(长度O．5岫左右)或乳头状微突起(长度o．29m 左右)，在SF0表面，室管膜上可见丰富的纤维网及少数神 经元样结构，主要分布在嘴侧区和过渡区，神经元样结构的 胞体直径有4．5岬，突起细氏，末端伸入室管膜细胞之间。 2．2EAE组：在EAE潜伏期，室管膜细胞极度隆突，表面可 见分泌物，纤毛和微绒毛减少，室管膜上可见巨噬细胞样细 胞和淋巴细胞样细胞附着。在EAE发病期可见SFO室管膜 细胞表面有火山口样结构，直径1-3pm，细胞内有残余的齿 轮状胞核结构；凡有此结构的细胞，胞体平坦不再向脑室隆 突，其体积均较正常小，细胞形态不再规则，细胞问界限不 清。室管膜表面的微绒毛、微突起变化不大，有的室管膜表 面细胞可见到小破孔，纤维网丰富