分子发光分析法00108.pptVIP

1. 分立取样式 ——是一种在静态下测量发光信号的装置，它利用移液管或注射器取一定量的试剂与试样加入发光反应池中混合，或把试剂与试样加入贮液管中，开启塞子使溶液流入反应池中混合，化学发光反应立即发生，发光信号通过光电倍增管检测，记录下发光强度。根据发光峰面积的积分值或峰高进行定量分析 优点：设备简单，造价低，体积小，灵敏度高等 缺点：手工进样重复性差，测定精密度不高；难以实现自 动化，分析效率低 2. 流动注射式（FIA，flow injection analysis ） ——是动态测量法，试液和试剂通过蠕动泵传送，并在流动中进样混合，恰好流动至盘管中反应发光，流动注射式发光分析的自动化程度、精密度和准确度都比较高，分析速度快，适用于批量试样的测定 作业： 一、名词解释 1、荧光；2、磷光；3、振动驰豫；4、系间跨越；5、量子效率；6、荧光猝灭 二、区别下列图中三个峰：吸收峰、荧光峰、磷光峰，并说明判断原则 三、为什么荧光光度法的灵敏 度比分光光度法高？ 2、单色器 大多数荧光光度计一般采用两个光栅单色器，有较高的分辨率，能扫描图谱，既可获得激发光谱，又可获得荧光光谱 第一单色器作用：激发单色器，分离出所需要的激发光，选择最佳激发波长? ex 。 第二单色器作用：发射单色器，滤掉一些杂散光和杂质所发射的干扰光，用来选择测定用的荧光波长? em。 在选定的? em 下测定荧光强度，定量分析 3、样品池 盛放测定溶液，通常是石英材料的方形池，四面都透光，只能用手拿棱或最上边 4、检测器 荧光的强度一般较弱，要求检测器有较高的灵敏度，荧光光度计采用光电倍增管 荧光分析比吸收光度法具有高得多的灵敏度，是因为荧光强度与激发光强度成正比，提高激发光强度可 大大提高荧光强度 5、读出装置 记录仪记录或打印机打印出结果，扫描激发光谱和发射光谱 同步荧光光谱 1971年Lloyd首先提出用同步扫描技术来绘制光谱图，即同时扫描激发单色器和发射单色器波长的条件下测绘光谱图。 所得的荧光强度I和波长曲线为同步荧光光谱。 同步扫描技术 根据激发和发射单色器在扫描过程中彼此间所保持的关系，同步扫描可分为固定波长差(??)和固定能量差及可变波长三种： 1、固定波长差同步扫描荧光法 ??＝ ?ex- ?em＝常数 2、固定能量差同步扫描荧光法 使发射单色器与激发单色器之间保持一个恒定的波数差 3、可变波长同步扫描荧光法 使两单色器在扫描过程中以不同的速率同时进行扫描 同步扫描技术可简化光谱，谱带变窄，减少光谱重叠，提高分辨率。 合适的??可减少光谱重叠： 酪氨酸和色氨酸的荧光激发光谱相似，发射光谱严重重叠，但??15nm的同步光谱只显示酪氨酸特征光谱； ??60nm时，只显示色氨酸的特征光谱，实现分别测定。 六、荧光光谱法与紫外-可见分光光度法比较 （一）相同点 （二）不同点 磷光分析法 phosphorescence 与荧光相比，磷光的特点： 1、磷光寿命比荧光长 2、磷光辐射的波长比荧光长 （一）磷光强度： Ip＝KC （二）温度对磷光强度的影响 试样需在液氮温度（77K）或液氦（4K）下测定 （三）磷光分析仪器 与荧光分析仪器相似，主要差异如下： 1. 试样室 试样需在液氮温度（77K）或液氦（4K）下测定－低温磷光（将液池放在盛放液氮的杜瓦瓶内） 固体表面室温磷光分析需特制试样室 2. 磷光镜 有些物质既可产生荧光，又能产生磷光。用机械切光装置——磷光镜区别荧光和磷光。利用荧光寿命短，磷光寿命长消除荧光干扰。 磷光仪器在荧光仪样品池上增加磷光配件：低温杜瓦瓶和斩光片。如右图所示。斩光片的作用是利用其分子受激所产生的荧光与磷光的寿命不同获取磷光辐射 （四） 室温磷光 低温荧光需低温实验装置且受到溶剂选择的限制，1974年后发展了室温磷光（RTP）。 1）固体基质室温磷光 在室温下以固体基质（如纤维素等）吸附磷光体，增加分子刚性、减少三重态猝灭等非辐射跃迁，从而提高磷光量子效率。 2）胶束增稳室温磷光 利用表面活性剂在临界浓度形成具多相性的胶束，改变磷光体的微环境、增加定向约束力，从而减小内转换和碰撞等去活化的几率，提高三重态的稳定性。 3）敏化溶液室温磷光 （二）荧光分析法的应用 1. 无机化合物的分析 无机化合物中，能直接产生荧光并应用于测定的为数不多，但与有机化合物生成发荧光的有机配合物后，进行荧光分析的元素达70多种，其中较常采用荧光法测定的元素有：Be、Al、B、Ga、Se、Mg、Zn