脐血干细胞定向分化及治疗肝衰竭实验与临床研究.pdfVIP

摘 要 目的：通过细胞培养及动物实验探讨人脐血干细胞(human umbilicalcordblood stem 内定向分化为有一定功能的肝细胞的条件及能力：HUCBSC和脐血 浆对实验动物肝衰竭的治疗效果及其可能机理。通过I临床治疗及随访 umbilicalcordbloodstemcell 观察人脐血干细胞移植(human 应，为建立HUCBSCT治疗重型肝炎的新方法提供实验和临床依据。 方法：在HUCBSC定向分化为肝细胞的细胞培养实验中，采集 umbilicalcord 人脐带fill(human factor， 实验组培养瓶内加入成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowth FGF)及促肝细胞生长因子(hepatocytegrowth 肝上清液培养，对照组培养瓶内只加FGF培养。观察细胞生长分化 状况，免疫组化检测人甲胎蛋El(alpha (albumin，ALB)。 在HUCBSC分化为肝细胞的动物实验中采用密度梯度离心法分 umbilicalcordbloodmononuclear 离人脐带血单个核细胞(human cell， 般情况并于处理后的不同时间分别随机处死各组大鼠，取大鼠肝脏组 织作病理学检查及免疫组织化学染色检测大鼠肝组织中人AFP及人 inactive—specific ALB。用人X染色体上的YdST(X 引物，从大鼠石蜡包埋肝脏纽织中提取DNA，进行PCR及凝胶电泳 分辑戳梭测大鼠翳醚缀织DNA孛是否存在人类DNA。 在脐血浆治疗大鼠肝衰竭实验中，经腹腔内涟射CCL4建立大鼠 急性肝衰竭模型后，大鼠随机分为明组：第一组为对照组，第二组为 生理盐水缝，第三组为成人血浆缝，蘩霹组必脐盘浆缀。黢察大鼠的存 活率、剐∽、TBIL及AFP值，并取大鼠肝组织进行组织病理学检测。 在HUCBSCT治疗重型肝炎的临床观察实验中，以低温离心法分 离HUCBSC。踅型病毒性爨炎瘸人被隧枫分为黧缀：第一组必对照 以及副作用与安全性。并对部分病人进行了疗效随访。 结巢：HUCBSC定囊分纯秀黔绸照麓妻罄藏培养实验结果显示对 照组贴壁细胞形态大多为梭形细胞，可能为成纤维细胞，未见多边形 细胞。实验组细胞形态除梭形细胞外，还可见圆形，类圆形及多边形 鞠旎，量类．il手纲施形态。实验缝培养维麓的AFP，ALJ3兔疫缝化染色 为阳性。而对照组培养细胞经AFP，ALB免疫组化染色后未见阳性 细胞。此外，聚用肝紊作为抗凝剂采集的HUCBMNC生长分化优子 粟霜稳椽装钠律为抗凝裁者；HGF的诱导分纯效祭优予耱翳上渣液。 HUCBSC分化为脬细胞的动物实验结果显示A组大鼠肝脏组织 时可觅到部分入AFP耩人ALB鬻蕊细蕤，主要分布于汇管速、翳窦 和胆小时中央静脉周嗣，部分阳性细胞内可见双核。B组和c组大鼠 在21天和(或)1月时肝脏内可以检测到人x染色体基因片段存在， 在A组大鼠肝脏内未见到此片段PCR产物。 脐血浆治疗大鼠肝衰竭实验结果显示脐血浆组大鼠存活率高于 成人血浆组、生理盐水组及对照组。脐血浆组大鼠ALT及TBIL值低 于成人血浆组、生理盐水组及对照组。同时脐血浆组的AFP值高于 其它三组。大鼠肝组织病理学结果显示经过五天的脐血浆治疗后，肝 细胞坏死及单核细胞浸润明显减轻，仅见点状肝细胞坏死，同时可见 肝细胞再生。对照组及生理盐水组可见多小叶的肝细胞坏死及大量的 淋巴细胞浸润，没有明显的肝细胞再生。在成人血浆组可见局灶性坏 死、中度淋巴细胞浸润及少数局灶性肝细胞再生。 HUCBSCT治疗重型肝炎的临床观察实验结果显示各组病人治 PE组的TBIL在治疗后明显降低。病人疗效随访结果显示在随访期间 内HUCBSCT组病人的ALB值高于对照组。在治疗过程中 HUCBSCT组未发现不良反应及移植物抗