组织工程化人工皮肤实验研究.pdf

中田协和医科大掌中国医尊q牛学’兜碍【士掌位论文 中文摘要 f在皮肤移植中，自体供皮不足是导致皮肤缺损患者得不到及时治疗的根本原 因。过去，临床医师尝试采用异体皮、异种皮来覆盖皮肤缺损创面，它们只能暂时 覆盖创面，起到防止体液丢失，防止感染的作用，这些方法都不能完全修复创面， 促进伤口愈合。随着一门新的学科一组织工程学的诞生，人们开始应用细胞生物学、 分子生物学和工程学的原理和技术体外培育皮肤替代物。产’一 本研究应用组织工程学的原理和方法，从人胎儿皮肤中分离表皮角朊细胞和真 皮成纤维细胞，应用本室提取的I型胶原制备支架材料，体外培育出人工表皮、胶 原海绵人工真皮和胶原凝胶人工真皮。 fi． 人胎儿表皮角朊细胞的分离、培养和人工表皮的培育。本研究通过消化后 表、真皮形态．角朊细胞活力，角朊细胞增殖和成纤维细胞污染等方面比较了三种 酶消化、分离表皮角朊细胞的优缺点，证明用Dispase消化分离的表皮角朊细胞，角 朊细胞活性高，细胞增殖迅速，融合成片时间短，没有成纤维细胞污染。采用Dispase 从人胎儿皮肤中分离出的表皮角朊细胞，细胞增殖迅速，没有成纤维细胞污染；应 用无血清培养法．体外培养出了人工表皮皮片。 2． 胶原海绵人工真皮的制备。采用本室自制的I型胶原，经冷冻干燥，甲 Sulfate。CS) 醛交联后，制备出了胶原海绵和胶原一硫酸软骨素(Chondroitin 胎儿真皮成纤维细胞，体外培养4周，制备出了胶原海绵和胶原--CS人工真皮。HE 染色染色显示，培养过程中，成纤维细胞在2种支架内粘附和增殖良好，细胞数量 逐渐增多，说明2种支架具有较好的理化性质，可以引导成纤维细胞增殖。培养过 程中，成纤维细胞分泌出I型胶原和纤维连接蛋白等细胞外基质．并逐渐重建支架 内基质结构：培养3—4周后，人工真皮整体结构类似正常真皮。2种支架比较，胶 原支架中添加硫酸软骨素，有利于成纤维细胞的粘附、增殖和支架中细胞外基质的 沉积。 3． 胶原凝胶人工真皮的制备。将碳酸氢钠、D肛M培养基、谷氨酰胺、胎牛血 清、人胎成纤维细胞悬液和本室自制的I型胶原，在低温无菌条件下混合，体外培 养2周，制各出胶原凝胶人工真皮。HE染色显示，成纤维细胞在凝胶内分布均匀。 细胞沿胶原纤维捧列，呈现出典型的长梭形；在培养过程中，细胞数量显著增多。 中国埘u■曩嘣斗大掌中U曩油蝌掌院习E士掌位论文 免疫组化染色显示，成纤维细胞能够分泌l型胶原和纤维连接蛋白等细胞外基质， 并逐渐取代凝胶内的I型胶原，培养2周末，凝胶真皮结构接近正常真皮。 、—矿，一 总之J本研究共研制出了一种人工表皮、两种人工真皮(胶原海绵和胶原凝胶 ●__-●___-●_一_●-——‘。-1。’_一 人工真皮)．它们具有较好的理化性质；HE染色和免疫组化染色证实．其形态、结 构和生化功能类似正常成人的表皮和真皮，本研究制各的人工表皮和人工真皮具有 潜在的应用前景。 中雷埘H■医科大学中重皇E掌抖掌胃口啊j-|p吐论文 Abstract has For oflostskin been a for problemsurgeons． ages，thereplacement constantly hasbeen usedfor closurein skin wound patients Althoughautologousgraft successfully 、vidl lost kindoftreatmentinflictsadditional therearenotsufficient