质粒pLXSN-bcl-2治疗短暂性局灶性脑缺血及对热休克蛋白70表达影响的实验研究.pdfVIP

中文摘要 目 的 目前，转bcl一2基因治疗缺血性脑血管病的研究尚处于探索阶段，其 中载体的选择和基因导入途径是该治疗能否临床应用的关键。国内外多采 用以病毒为载体通过脑缺血局部注射的方法，但该方法由于一些不可避免 的缺陷使临床广泛应用受到很大限制。本实验为寻求更为简便快捷的治疗 方法，用质粒作为载体携带bcl一2基因，直接注入短暂性局灶性脑缺血大 鼠的侧脑室内，观察该方法能否收到良好的治疗效果。热休克蛋白70 shock (Heat protein70，Hsp70)在应激状态的细胞内大量存在，对缺血状态 的细胞有保护作用。近来有研究发现hsp70蛋白的脑保护作用可能与其抗 凋亡效应有关。因此，本实验欲观察bel一2的过度表达能否引起hsp70蛋 白表达的变化，为进一步探讨二者之间的关系提供依据。 方 法 采用改良的Longa栓线法…构建大鼠局灶性脑缺血模型，用立体定位 仪确定大鼠侧脑室精确位置，缺血后立即向治疗组和对照组大鼠侧脑室中 理盐水各20ul。缺血一小时后将拴线拔出进行缺血鼠脑再灌注。存活的各 chloride红四氮唑)染液显示鼠脑梗死灶， (2％2，3，5一triphenyhetrazolium 并用直接测量法比较治疗组和对照组大鼠各时间点脑梗死体积变化。 结 果 逐渐增加，均在再灌注24h达到峰值，再灌注48h、72h表达逐渐降低，二者 均在梗死灶周围的“半暗带”区大脑皮质以及对损伤比较敏感的海马、尾状 核和丘脑的部分区域表达最强。但治疗组两种蛋白的表达在各时间点均较 对照组强，而注射空质粒和生理盐水的两个对照组之间两种蛋白的表达在 各个时间点均无差异。治疗组可见bcl一2蛋白在全脑广泛表达，而对照组 仅在梗死灶局部少量表达。 个对照组中大鼠的脑梗死体积无差异。 结 论 在短暂性局灶性缺血的大鼠脑组织中广泛表达，且以缺血区表达最强，表达 产物能发挥生物学效应，减小鼠脑梗死体积，从而保护缺血脑组织，因此该 治疗方法具有可行性。 增多，间接保护了缺血脑组织。因两种蛋白表达的时间窗一致，且均有抗凋 亡作用，因此推N--者之间可能存在协同抗凋亡效应。 关键词：脑缺血；神经元；基因治疗；质粒；bcl一2；hsp70 ·2· APlasmid into pLXSN——bcl—-2Introventrically injected TransientFocalIschemic RatBrainandthe Influence tothe ofthe Protein Expressionhsp70 ABSTRACT At researchersreinterestedinthebcl一2 transfer present，many gene the of cerebralischemicdiseases．Thereretwocritical inall therapy problems the andtheve